西咪替丁对低剂量率照射比格犬肝细胞凋亡的影响及其机制研究(3)
2.5 凋亡相关蛋白表达情况检测采用免疫组化法检测比格犬肝组织中Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53蛋白的表达情况。取“2.3”项下肝组织石蜡切片,脱蜡后置于水中,以EDTA抗原修复液进行修复,随后加入3%H2O2以灭活内源性过氧化物酶,用10%山羊血清封闭30 min,分别滴加Bcl-2、Bax、Caspase-3、p53多克隆抗体(稀释度均为1 ∶ 50),4 ℃孵育过夜;滴加HRP标记二抗(1 ∶ 1),常温孵育50 min;以DAB显色,Harris苏木精染色液轻度复染,脱水、透明、封片,置于显微镜下观察(p53阳性细胞的细胞核呈棕黄色,其余蛋白阳性细胞的胞质内可见棕黄色颗粒)。每只犬每张切片随机挑选6个视野拍照,采用ImagePro Plus 6.0软件对染色阳性区域进行分析,计算阳性细胞的累积光密度值(IOD)以表示凋亡相关蛋白的表达水平。
2.6 统计学方法
采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。采用Shapiro-Wilk法进行正态性检验,采用Levene检验进行方差齐性检验。符合正态分布且方差齐的计量资料以x±s表示,组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)。P<0.05为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 肝细胞凋亡检测结果
正常对照组比格犬肝组织中偶见凋亡细胞;停止照射后 ......
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