2.6 Western blot法检测心肌组织中p-PI3K和p-Akt蛋白表达

    称取60 mg左右大鼠心肌组织，充分剪碎研磨，加入100 μL的细胞裂解液，以12 000 r/min(离心半径为8 cm)离心20 min，取上清液即为蛋白样本。按5×上样缓冲液的比例加入蛋白样品及缓冲液充分混匀，99 ℃加热变性10 min，再以10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白后，将蛋白电转移至PVDF膜上。经5%脱脂奶粉封闭后，滴加抗磷酸化p-PI3K单克隆抗体和p-Akt单克隆抗体(稀释比例均为1 ∶ 1 000)，4 ℃孵育过夜，再滴加辣根过氧化物酶标记山羊抗兔二抗(稀释比例为1 ∶ 20 000)，常温孵育1 h，经ECL发光试剂曝光后观察结果。采用Image J软件分析条带的光密度值，以GAPDH为内参，以目的蛋白与内参的光密度比值表示相应蛋白的表达水平。

    2.7 统计学分析

    采用SPSS 19.0軟件进行统计分析，定量资料采用x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间比较采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

    3 结果

    3.1 大鼠的一般情况

    与对照组比较 ......