2.3 大鼠结肠内容物中SCFAs的含量测定

    采用气相色谱(GC)-质谱(MS)联用法测定SCFAs含量。

    2.3.1 样品预处理 在进行大鼠解剖的过程中，各组取8只大鼠收集其结肠内容物1～2粒，液氮冻存，备用。取肠道内容物，冰浴中解冻(减少待测成分的降解)，参照文献方法[11]操作，取样约50 mg，加入1 mol/L的氢氧化钠溶液300 μL匀浆后，在4 ℃下以500 r/min离心20 min;取上清液，与2，4-二硝基苯肼盐酸盐进行2次衍生化反应;在4 ℃下以1 000 r/min离心15 min，取上清液，加入等体积氯仿萃取，然后量取0.5 mL氯仿萃取层转移至具盖顶空进样瓶中，备测。

    2.3.2 色谱条件 色谱柱：Restek RxiTM-5MS色谱柱(30 m×250 ?m);程序升温(45 ℃保持1 min;从45 ℃以20 ℃/min升至260 ℃;从260 ℃以40 ℃/min升至320 ℃;320 ℃保持2 min);进样口温度：270 ℃;载气：氦气;进样口温度：270 ℃;流速：1.0 mL/min;顶空进样。

    2.3.3 质谱条件 采用电子轰击离子源;电子轰击能量：70 eV;离子源温度：220 ℃;检测器温度：270 ℃;检测电压：1 450 V;质谱图采集速率：20 spectra/s;质谱扫描质量范围：38～550 Da ......