2.3 生物样本采集

    给药结束后，断颈处死大鼠，在距其胃幽门部1 cm处量取十二指肠肠段10 cm，以液氮速冻后，立即于 -80 ℃条件下保存，备测。

    2.4 大鼠十二指肠组织中外排转运蛋白和紧密连接蛋白的表达水平检测

    采用Western blotting法检测目标蛋白。取“2.3”项下采集的十二指肠肠段组织，以RIPA裂解液裂解后，12 000×g冷冻离心10 min，取上清液，采用BCA试剂盒进行蛋白浓度测定。取蛋白样品适量，煮沸变性，在200 V恒压下经10%十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离，再以300 mA恒流电转印至PVDF膜，用5%脱脂奶粉于室温封闭2 h;然后分别加入P-gp 抗体(1 ∶ 1 000)、Mrp2抗体(1 ∶ 20)、Bcrp 抗体(1 ∶ 100)、Claudin-1 抗体(1 ∶ 500)、Occludin 抗体(1 ∶ 1 000)、ZO-1 抗体(1 ∶ 500)、GAPDH抗体(1 ∶ 1 000)，4 ℃下孵育过夜;次日以TBST缓冲液洗涤10 min×3次，然后加入HRP标记的二抗(1 ∶ 3 000)，室温孵育 1 h后，以TBST 洗涤10 min×3次;以ECL超敏化学发光液反应后 ......