2.3 总蛋白含量测定方法的建立

    2.3.1 对照品溶液的制备 取牛血清白蛋白对照品约10 mg，精密称定，加水使溶解并定容至10 mL，摇匀，制成质量浓度为1 mg/mL的对照品溶液，即得。

    2.3.2 供试品溶液的制备 取葵花盘样品粉末(50目)1 g，按料液比1 ∶ 75(g/mL)加入水，于50 ℃超声提取(功率：250 W，频率：25 kHz)45 min，滤过，取续滤液，即得。

    2.3.3 显色反应时间的确定 精密吸取供试品溶液适量，加水定容至1.0 mL，加考马斯亮蓝溶液(取考马斯亮蓝G250试剂约0.05 g，加乙醇25 mL使溶解，再加入磷酸50 mL，最后加水定容至500 mL，混匀，滤过，取续滤液，即得)5 mL，显色反应一定时间后，采用紫外-可见分光光度法在波长595 nm下测定。经考察不同染色时间(1～50 min)对供试品溶液吸光度的影响后发现，显色反应15 min后供试品溶液吸光度基本保持恒定，故确定总蛋白含量测定方法的显色反应时间为15 min。

    2.3.4 方法学验证 参照2015年版《中国药典》(四部)通则9101方法[17]进行方法学考察 ......