2.3 基因分型

    取“2.1”项下提取的DNA，通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出含有待检SNP位点的目的片段，然后用虾碱性磷酸酶(SAP)去除PCR体系中剩余的脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)和引物，再加入单碱基延伸引物，其3'末端碱基紧挨SNP位点，且与目的片段上的碱基完全互补，采用4种ddNTP替代dNTP，这样，探针在SNP位点处仅延伸一个碱基，连接上的ddNTP与SNP位点的等位基因对应。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测延伸产物与未延伸引物间的分子量差异，确定该点处碱基，进而进行SNP分型。参考文献[6]设置单碱基延伸反应条件：94℃预变性30s;94℃变性5s.52℃退火5s，80℃延伸5s，40个循环，其中每个循环中52℃退火和80℃延伸再进行5个循环;最后72℃延伸3min。

    2.4 数据处理

    采用Sequenom MassArray飞行时间质谱生物芯片系统，以x₂检验将对照组和癫痫组受试者GRIN2B基因12个SNP位点进行Hardy-Weinberg平衡检验 ......