2.4 马钱苷对细胞凋亡的影响考察

    采用Hoechst 33342荧光染色法检测细胞凋亡形态变化。取对数生长期的HepG2细胞，按1×106个/孔接种至6孔板中，将细胞随机分为对照组和马钱苷低、中、高浓度组，每组设3个复孔。细胞培养至单层细胞密度约90%左右时，弃去培养基，马钱苷低、中、高浓度组细胞分别加入马钱苷终质量浓度分别为50、100、150 ?g/mL的含药培养基5 mL，对照组细胞加入等体积培养基，培养24 h。收集细胞，经Hoechst 33342荧光染料避光染色10 min后，用PBS清洗5 min×3次，使用荧光显微镜观察各组细胞的形态变化。采用流式細胞术检测细胞凋亡率。另取HepG2细胞同上述方法分组、给药、培养24 h后，收集细胞，用细胞凋亡检测试剂盒中的Binding buffer 500 μL重悬，并加入Annexin Ⅴ-FITC和PI染液各5 μL，轻轻混匀，室温下避光孵育10～15 min，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率：细胞凋亡率=早期凋亡率+晚期凋亡率。上述试验重复3次。

    2.5 马钱苷对细胞周期分布的影响考察

    采用流式细胞术检测细胞周期分布 ......