沙苑子多糖促进兔半月板纤维软骨细胞增殖的作用机制研究(3)
2.4 沙苑子多糖对软骨细胞周期的影响考察采用流式细胞术检测。将软骨细胞以1×106个/孔接种于6孔板中,按“2.2”项下方法进行分组和给药,每组设置5个复孔,于5%CO2、37 ℃条件下培养72 h。收集细胞于1.5 mL离心管中,加入70%无水乙醇固定1 h后,按细胞周期检测试剂盒说明书进行相关操作,然后使用流式细胞仪检测细胞周期的变化。
2.5 沙苑子多糖对软骨细胞中Col Ⅱ、ALP蛋白表达水平的影响考察
采用ELISA法检测。将软骨细胞以5×104个/孔接种于96孔板中,按“2.2”项下方法进行分组和给药,每组设置5个复孔,于5%CO2、37 ℃条件下培养72 h后,按ELISA试剂盒说明书进行相关操作,检测Col Ⅱ、ALP蛋白表达水平。
2.6 沙苑子多糖对软骨细胞中TGF-β1、BMP-2 mRNA表达水平的影响考察
采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测。将软骨细胞以1×106个/孔接种于6孔板中,按“2.2”项下方法进行分组和给药 ......
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