吡格列酮对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化的影响及机制研究(3)
2.3 细胞分组与处理根据预试验和“2.2”项下MTT法试验结果,将细胞随机分组——(1)对照组:5.5 mmol/L葡萄糖(以含2%FBS的DMEM培养基配制,下同);(2)高糖组:30 mmol/L葡萄糖;(3)PIO干预组:30 mmol/L葡萄糖+5.0 μmol/L PIO;(4)GW9662干预组:30 mmol/L葡萄糖+5.0 μmol/L PIO+5.0 μmol/L GW9662。各组细胞加入相应的葡萄糖或/和药物后进行培养,其中对照组、高糖组和PIO干预组均分别设6、12、24、48 h共 4个时间点进行相关指标动态检测,GW9662干预组在48 h时进行相关指标检测。分别提取各组细胞的RNA和蛋白用于后续检测。试验均重复6次。
2.4 Real-time PCR法检测NRK-52E细胞中PPARγ、PTEN mRNA的表达水平
采用TRIzol法提取各组细胞总RNA,再采用核酸蛋白分析仪检测RNA浓度和纯度后 ......
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