2.3.5 大鼠松果体超微结构观察 取血后，每组随机选2只大鼠，按“2.3.4”项下方法快速剖取松果体，于30 s内置于2%戊二醛溶液中固定2 h，然后转至0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS，pH 7.2)中，常规1%锇酸固定、脱水、包埋、切片(厚度70 nm)、电子染色后，置于电子显微镜下观察松果体超微结构变化。

    2.3.6 大鼠松果体生物钟基因检测 取血后，取各组剩余的5只大鼠，按“2.3.4”项下方法快速剖取松果体，采用Trizol法分离提取其总RNA，检验纯度和浓度后，将总RNA逆转录为cDNA，并以cDNA为模板进行PCR扩增。反应体系：cDNA模板3 μL，上、下游引物各2.5 μL，2×QuantiFast SYBR Green PCR Master Mix 12.5 μL、无酶水4.5 μL，总体系为25 μL。反应条件：95 ℃预变性30 s;95 ℃变性5 min，95 ℃退火10 s，60 ℃延伸35 s，共40个循环。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参，采用2-ΔΔCt法计算Clock、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1和Cry2基因的mRNA表达水平(其中Ct表示每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环次数) ......