2.3.3 下丘脑和股骨组织中OPG、RANKL mRNA表达情况检测 采用逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测。各组大鼠采血后，取其下丘脑和股骨组织适量，用RNA抽提试剂盒提取组织中总RNA，对RNA纯度、含量进行检测后使用逆转录试剂盒获取cDNA。以上述cDNA为模板，进行扩增。反应体系(共20 μL)：SYBR Pri mix 10 μL，上、下游引物各1 μL，模板cDNA 2 μL，ddH2O 6 μL;反应条件：95 ℃预变性20 s;95 ℃变性10 s，62 ℃退火30 s，70 ℃延伸30 s，共45个循环。以GAPDH为内参，使用荧光定量PCR仪检测，并以2-ΔΔCt法计算各目标mRNA的表达量(Ct表示每个反应管内荧光信号强度达到设定阈值时所经历的循环数)。

    2.3.4 下丘脑和股骨组织中OPG、RANK蛋白表达情况检测 采用Western blotting法检测。取“2.3.3”项下各组大鼠下丘脑和股骨组织适量，加入RIPA裂解液于冰上裂解30 min，采用BCA蛋白测定试剂盒检测蛋白浓度。蛋白经变性后，取适量用上样缓冲液稀释，行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳后，转移至聚偏二氟乙烯膜上 ......