2.3 细胞中ER-α、ER-β蛋白表达情况检测

    采用Western blotting法检测。取“2.1”项下经培养且处于对数生长期的细胞适量，用PBS清洗2次，经0.25%胰蛋白酶消化后，以不含血清的DMEM高糖培养液调整细胞密度，并按1×106个/孔接种于6孔板中，每孔总体积为2 mL。培养24 h待细胞贴壁后，将其随机分为空白组、β-E2组(1×10-8 mol/L)和TSG低、中、高浓度组(浓度参考“2.2”项下试验结果设置)，每组设4个复孔。吸弃上清液，空白组加入含5%CDT-FBS、1%青-链霉素双抗的无酚红DMEM高糖培养液2 mL，各给药组加入含相应药物以及5%CDT-FBS、1%青-链霉素双抗的无酚红DMEM高糖培养液2 mL。培养48 h后，收集细胞，经细胞裂解液裂解后，以12 000 r/min离心15 min，取上清液按BCA法测定蛋白浓度。将蛋白于100 ℃变性5 min后，取20 μg行SDS-PAGE。电泳后转移至PVDF膜上，室温封闭15 min ......