灵芝酸C2调控S6K/SREBPs信号通路对肝细胞脂代谢的影响及机制研究(1)
摘 要 目的:研究灵芝酸C2(GAC2)的体外降脂作用,并基于核糖体S6蛋白激酶(S6K)/固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)信号通路探讨其可能机制。方法:以人肝细胞HL-7702为对象,采用MTT法考察低、中、高剂量(5、10、20 μmol/L,下同)GAC2作用后細胞的相对活力;以洛伐他汀为阳性对照,采用酶联免疫吸附测定法检测低、中、高剂量GAC2作用后细胞中胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)的含量,并采用尼罗红染色法观察细胞内的脂质堆积情况;转染SREBPs报告基因质粒后,以25-羟基胆固醇(25-HC)为阳性对照,采用荧光素酶报告基因法检测低、中、高剂量GAC2作用后细胞中SREBPs荧光素酶的相对活性;以25-HC为阳性对照,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测中、高剂量GAC2作用后细胞中SREBPs及其下游基因mRNA的表达情况;以SREBPs抑制剂(25-HC)、S6K抑制剂(雷帕霉素)为参照,采用Western blotting法检测细胞中SREBP-1、SREBP-2的表达情况[以成熟SREBPs(n-SREBPs)表示]以及磷酸化S6K与S6K的相对表达量比值(p-S6K/S6K比值);利用AutoDock 4.0等软件对S6K与GAC2进行分子对接 ......
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