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编号:13798013
基于PI3K/Akt/GSK3β信号通路的芥子酸抗Aβ1-42致PC12细胞损伤的机制研究(3)
http://www.100md.com 2020年10月15日 《中国药房》 202020
     2.3 PC12细胞的形态观察和存活率检测

    采用倒置显微镜观察并采用MTT法检测。收集对数生长期的PC12细胞按5×104个/mL接种至96孔板中,每孔100 mL,按照“2.2”項下方法分组,每组设置6个复孔。继续培养24 h后,Aβ+SA+LY组、Aβ+LY组、LY组先加入LY294002 10 μmol/L孵育1 h;除对照组和LY组外,其余4组分别加入Aβ1-42 2 μmol/L处理24 h以复制损伤细胞模型;随后,Aβ+SA组和Aβ+SA+LY组加入SA 100 μmol/L,继续培养24 h,置于倒置显微镜观察其形态并拍照。每孔加入 MTT溶液(5 mg/mL)10 μL,继续培养4 h,小心吸去孔内培养液,每孔加入 DMSO 150 μL,低速振荡10 min,以酶标仪于570 nm波长处检测吸光度(OD)值,并按如下公式计算细胞存活率:细胞存活率(%)=样品组OD均值/对照组OD均值×100%。上述试验重复3次。

    2.4 PC12中细胞PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β蛋白表达水平的检测

    采用Western blotting法检测 ......
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