姜黄素和姜黄素联氨基抗肝癌作用比较及机制研究(3)
2.3 CUR和HZC对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响考察采用流式细胞术检测。取对数生长期HepG2细胞,常规消化后,按5×105个/孔接种于6孔板中,培养24 h,将细胞随机分为不同浓度的CUR组或HZC组以及对照组,每组设6个复孔。各给药组分别加入相应CUR或HZC药液(终浓度均为10、20、40 μmol/L,浓度根据前期预试验结果设置),对照组均加入PBS,培养48 h。收集、洗涤细胞,先后加入5 μL的Annexin V-FITC和5 μL的PI染色试剂,混匀,在室温下避光反应15 min后,用流式细胞仪分别检测细胞周期分布和凋亡情况。上述试验重复3次。
2.4 CUR和HZC对HepG2细胞中凋亡相关蛋白表达的影响
采用Western blotting法检测。按“2.3”项下方法取HepG2细胞接种、培养,分为不同浓度的CUR组或HZC组以及对照组,每组设6个复孔。各给药组分别加入相应CUR或HZC药液(终浓度均为10、20、40 μmol/L,浓度根据前期预试验结果设置),对照组加入DMEM培养基,培养48 h。在各孔中加入含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液冰浴裂解25 min ......
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