紫铆花素对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用及对线粒体功能的影响研究(3)
2.4 细胞凋亡率检测以5×105个/孔将PC12细胞接种于6孔板中,待细胞贴壁后,按“2.2”项下方法分组、处理,每组设置3个复孔。建模培养4 h后,用胰蛋白酶消化,收集细胞悬液,D-PBS洗1次,1 000 r/min離心5 min,弃去上清液,沉淀加入AnnexinⅤ-FITC和PI染色试剂各3 μL,吹匀,避光孵育15 min后,使用流式细胞仪检测细胞凋亡率。试验重复3次。
2.5 细胞内ROS含量检测
以5×105个/孔将PC12细胞接种于6孔板中,待细胞贴壁后,按“2.2”项下方法分组、处理,每组设置3个复孔。建模培养4 h后,吸弃旧培养基,D-PBS洗1次,用基础培养基将ROS试剂盒中的2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色液稀释至10 μmol/L,每孔加入上述染色液1 mL,置于37 ℃、5%CO2培养箱中孵育1 h,弃去培养基,D-PBS洗3次,用胰蛋白酶消化,收集细胞悬液,1 000 r/min离心5 min ......
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