小续命汤含药血清对氧糖剥夺模型大鼠星形胶质细胞的保护作用研究(3)
2.2.2 分离培养星形胶质细胞 取新生SD大鼠10只，于无菌条件下断头取脑，将脑组织放入4 ℃预冷的D-PBS培养皿内并置于冰盒上，漂洗3次后转入2 mL 4 ℃预冷的D-PBS液中。去除大鼠的脑膜及大血管，分离其大脑皮质并剪成1 mm3大小的碎块，加入0.25%胰蛋白酶，于37 ℃条件下消化30 min，随后加入DMEM/F12完全培养基内终止消化;在4 ℃、1 000 r/min条件下离心10 min，弃上清液，加入适量DNA酶消化至肉眼不见胶丝状物，以乙二胺四乙酸(EDTA)终止消化;以4 ℃、1 000 r/min再次离心10 min，弃上清液，收集沉淀，加入适量DMEM/F12完全培养基，吹打成单细胞悬液，调整细胞密度至1.5×106个/mL，接種于75 cm2的培养瓶中。采用差速贴壁法1 h去除成纤维细胞后，将细胞悬液转移至新的75 cm2培养瓶继续培养，每3天换液1次。培养7 d后，将培养瓶放入水平摇床(260 r/min，37 ℃)2 h，换液弃除小胶质细胞，放入培养箱中平衡1 h ......
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