朱琳琳 张明明 郭格格 徐祉轩

    中圖分类号 R965;R735.7 文献标志码 A 文章编号 1001-0408(2022)09-1082-06

    DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.09.10

    摘 要 目的 研究蓝萼甲素(GLA)对人肝癌HCCLM3细胞自噬与凋亡的调节作用机制。方法 HCCLM3细胞按不同实验目的主要设对照组、GLA 2.5 μg/mL组、GLA 5 μg/mL组、GLA 10 μg/mL组。对照组仅加入完全培养基，各给药组分别加入含GLA相应终质量浓度的完全培养基。采用流式细胞术检测细胞周期分布与凋亡情况;采用透射电镜观察细胞线粒体形态和自噬情况(仅设对照组、GLA 5 μg/mL组);采用JC-1染色和荧光倒置显微镜观察并检测细胞线粒体膜电位;采用Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Beclin1、活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白的表达;采用免疫共沉淀法检测细胞中Bcl-2与Beclin1的结合与解离(仅设GLA 5 μg/mL组、GLA 10 μg/mL组)。结果 与对照组相比，GLA 5、10 μg/mL能够诱发细胞周期显著阻滞于G2～M期、诱导线粒体膜电位显著下降、增加促凋亡作用，还能显著促进Bax、cleaved caspase-3、Beclin1蛋白表达，显著抑制Bcl-2蛋白表达(P0.05)。结果见图1、表1。

    3.2 GLA对HCCLM3细胞线粒体膜电位的影响

    细胞线粒体膜电位结果显示，对照组、GLA 2.5 μg/mL组、GLA 5 μg/mL组、GLA 10 μg/mL组细胞中红绿荧光强度比值分别为1.712±0.335、1.673±0.297、0.541±0.134、0.117±0.041 ......