匡微，郑银彬，李雨奇，田平平，苏强，向小聪(.川北医学院附属南充市中心医院组织工程与干细胞研究所，四川南充 67000；.川北医学院附属南充市中心医院心胸外科，四川南充 67000；.安徽医学高等专科学校医学技术学院，合肥 060；4.川北医学院附属南充市中心医院药学部，四川南充 67000)

    结肠癌是一种高异质性疾病，尽管其早期患者可以通过手术和辅助方案治疗，但治疗后仍有部分患者容易复发[1―2]，且大多数患者在诊断时已经处于中晚期阶段，常规疗法已经很难有效[3―4]，亟需寻找新的有效治疗方案。目前，结肠癌细胞的高转移特性是导致结肠癌预后不良的主要原因，其中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是肿瘤转移的重要因素。因此，开发可有效抑制结肠癌细胞EMT的药物尤为重要。

    毛萼乙素是从疏花毛萼香茶菜中提取的一种具抗癌活性的二萜类化合物，已有报道显示，其在急性髓系白血病[5]、乳腺癌[6]、胰腺癌[7]等恶性肿瘤中发挥了较好的治疗作用，但其是否可用于治疗结肠癌尚不明确。目前已有研究发现，异常的Wnt/β-联蛋白(β-catenin)激活可直接驱动结肠癌的进展和转移[8―10]，但毛萼乙素是否可通过该信号通路治疗结肠癌尚不明确。基于此，笔者以结肠癌细胞HT29、HCT116为研究对象，探讨毛萼乙素对上述2种细胞侵袭、迁移的影响，并基于Wnt/β-catenin信号通路初探毛萼乙素对结肠癌细胞EMT的作用，以期为毛萼乙素治疗结肠癌提供实验依据。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用主要仪器有TS100F型荧光倒置显微镜(日本Nikon公司)、DMi8型倒置显微镜(德国Leica公司)、810FUGE型低温高速离心机(美国Thermo Fisher Scientific公司)、TD-5Z型台式低速多管架离心机(四川蜀科仪器有限公司)、DYY-6D型电泳仪(北京六一生物科技有限公司)、Gel Doc XR+全自动凝胶成像系统(上海艾研生物科技有限公司)等。

    1.2 主要药品与试剂

    毛萼乙素(货号84745-95-9)购自云南西力生物技术股份有限公司；Licl(Wnt/β-catenin信号通路激活剂)购自北京伊诺凯科技有限公司(货号A53473)；XAV939(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂)购自美国MCE公司(货号284028-89-3)；兔源原癌基因蛋白质c-myc、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、β-catenin、T细胞因子4(TCF4)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、锌指转录抑制因子Snail、β-肌动蛋白(β-actin)均购自山东华安生物科技有限公司(货号分别为HA721182、ET107-37、ET1607-15、ET1601-5、R1401-11、ER0722、EM1706-65、ET1701-80)；羊抗免疫球蛋白G二抗购自美国Sigma公司(货号A6154)；ECL化学发光试剂购自上海雅酶生物科技有限公司(货号SQ201)；McCoy’s 5A培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司(货号分别为16600108、10100147) ......