陈建兴，尹文哲，孙奇峰，周 森，张亚龙，王 翌(哈尔滨医科大学附属第二医院骨四科，哈尔滨 150086)

    太空飞行中，暴露在微重力环境中的宇航员易出现骨密度降低、肌肉萎缩、肾功能降低、免疫功能紊乱等生理问题[1]。自从骨免疫学的概念首次提出以来，骨组织与免疫细胞之间的相互作用受到越来越多研究者的关注[2]。太空实验研究表明，微重力下T细胞的激活显著减少，白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)、γ-干扰素等炎症因子的分泌水平也显著改变[3―4]。

    骨碎补是一味补肾壮骨中药材，具有抗炎、加速骨折愈合、预防及治疗骨质疏松等功效[5―6]。笔者课题组的前期研究表明，在模拟微重力下骨碎补能够促进成骨细胞-破骨细胞共育体系中的成骨细胞增殖，提高碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性，上调Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2，Runx2)和骨保护素的基因表达[7]。柚皮苷是从骨碎补中提取的活性成分，具有抗氧化、抗炎、降低胆固醇、改善微循环等多种药理作用[8―9]。近年来，柚皮苷的骨保护作用被广泛研究。有研究表明，柚皮苷在去卵巢大鼠骨质疏松模型中能够促进骨形成，同时促进体外成骨细胞的增殖、提高ALP活性[10―11]；也可以提高伤口组织的生长因子水平，下调IL-1、IL-6、肿瘤坏死因子α的mRNA表达[12]。本研究通过建立T细胞-成骨细胞共育体系，探究模拟微重力下柚皮苷对成骨细胞增殖分化的影响，以期为航空医学应对失重性骨质丢失及临床上防治废用性骨质疏松提供一定的理论基础和研究思路。

    1 材料

    1.1 实验动物与细胞

    3日龄SD乳鼠12只，由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心提供，实验动物生产许可证号为SCXK(黑)2021-001，用于提取原代颅顶骨成骨细胞。小鼠T细胞购自赛百慷(上海)生物技术股份有限公司。实验方案经哈尔滨医科大学附属第二医院伦理委员会批准，批件号为SYDW2022-058。

    1.2 主要仪器

    X70型光学倒置相差显微镜购自日本Olympus公司；HF240型细胞培养箱购自德国Heraeus公司；DL-CJ-2NDⅡ型超净工作台购自东联北方科技(北京)有限公司；ST-16R型高速冷冻离心机购自美国Thermo Fisher Scientific公司；NY 14831型离心管、430488型冻存管、96孔板购自美国Corning公司；Infinite M200型多功能酶标仪购自奥地利Tecan公司；Applied Biosystems 7500型实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)仪购自美国ABI公司；PowerPacTMBasic电泳仪购自美国Bio-Rad公司；Tanon GIS2010全自动数码凝胶成像系统购自上海天能科技有限公司；BP310P型称量天平购自德国Sartorius公司；TY3062型旋转细胞培养系统(rotary cell culture sys‐tem ......