浅研检测5'—NT的方法学进展与评价
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【摘要】血清5'-核苷酸酶(5'-NT)测定对肝胆及多种疾病的诊断有较好的特异性和灵敏度。目前，有多种检测5'-核苷酸酶的方法，其中以新椎出的化学发光法测定血清5'-核苷酸酶灵敏度高、重复性好，能真实反映5'-核苷酸酶活性并能适用于临床。
【关键词】5'-核苷酸酶；比色法；酶反应连续监测法；化学发光法
【中图分类号】R446.1【文献标识码】B【文章编号】1004-4949(2012)09-0183-01
血清5'-NT活性升高主要见于肝胆胰系统疾病及某些恶性肿瘤，故有较特异的诊断价值。胆管结石或肿瘤所致之肝外胆管阻塞，以及肝癌或肝硬变引起肝内胆汁郁积时，病人血清5'-NT活性可升高2～6倍。原发性或继发性肝硬变时，病人血5'-NT升高较在慢性活动型肝炎时敏感。肝细胞损伤发生肝昏迷时，病人血清5'-NT活性多呈正常。原发性或继发性肝癌患者此酶活性升高的阳性率为88.4%～97.2%[1]。急性胰腺炎病人血清5'一NT略有升高，慢性胰腺炎时血清酶活性正常。
发生肝继发癌灶的胰腺癌病人血清酶活性明显升高，以肝内有继发病灶的胰头癌病人，血清5'-NT活性升高最为显著。原发性乳腺癌患者约有65%血清5'-NT活性升高，在发生全血性广泛转移的病人血清5'-NT活性全部升高。卵巢腺癌病人的血清5'一NT活性升高最为明显。能协助判断碱性磷酸酶(ALP)升高是肝胆系统疾病，还是骨髓系统疾病[2]。ALP在肝胆系统疾病和骨骼系统疾病时均可增高，除肝胆系统疾病增高外，骨骼系统疾病一般均不升高。有助于鉴别诊断肝细胞性黄疸和阻塞性黄疸，后者5'-NT明显高于前者。由于血清5'-NT测定对肝胆及多种疾病的诊断有较好的特异性和灵敏度，测定方法也得到不断改进，现对检测5'-核苷酸酶的方法作一浅述。
15'-NT的生物化学性
5'-核苷酸酶全称5'-核糖核苷酸磷酸水解酶(5'-Nucleoticlase，5'-NU或5'-NT).广泛分布在肝、胆、胰、肠、心、脑、肺、肾、等脏器和组织中，定位在细胞膜上，在肝内主要存在于胆小管和窦状间隙内，是一种催化核苷5'-单磷酸水解生成核苷和无机磷酸盐的酶，最适pH为6.6～7.0，受M 或Mn 激活，为Ni 所抑制。根据5'-核苷酸酶的细胞定位、作用底物和生化特征.可分为以下6种形式：胞外5'-核苷酸酶、胞浆5'-核苷酸酶I型、胞浆5'-核苷酸酶Ⅱ型、胞浆5'-(3')脱氧核糖核苷酸酶、线粒体-5'(3')脱氧核糖核苷酸酶 。人血清5'-核苷酸酶均来自胞膜，即胞外5'-核苷酸酶.在细胞胞浆内也有5'一核苷酸酶，但其特征性、分子大小均与前者有区别，且缺乏疏水区，5'-核苷酸酶的主要功能是参与核酸的分解代谢。
25'-NT的检测方法
2.15'-NT催化5'-IMP水解，产生次黄嘌呤核苷和氨。然后测定反应过程中产生氨的量，从而计算血清5'-NT活性单位。试剂配制和仪器简单，但灵敏度低，易受内源性和外源性NH 影响，空白过高。另一种是偶联谷氨酸脱氢酶法，此法因血清样品中含氨的干扰，以及测试系统中过高NADH造成非特异性氧化而无法计算。
2.2通过5LNT偶联嘌呤核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化氢酶和醛脱氢酶，借助过氧化氢反应测量334nm处NADPH吸光度上升的速率来计算5'-T活性。该法克服了以往5'一NT测试的困难，然而，鉴于试剂成本高，不适合临床使用。
2.3酶法测定5'-NT简便快捷、结果可靠，对肝胆疾患的诊断具有较高应用价值。酶法原理：
该法测定过程中需要P02-和Mg2+ (或Mnz+)共同参与，由于目前未能很好地解决P043和Mgz+(或Mnz+)生成沉淀的问题，使得测定试剂中P043一和Mgz+(或Mnz+)的浓度远远低于反应所需的最适浓度。从而造成测定灵敏度低，重复性不佳，给临床进一步推广带来不便。
2.4化学发光法。化学发光是产生于化学反应过程中的一种光辐射。其发光机理是：化学反应的反应物或生成物吸收了反应释放的化学能由基态跃迁至电子激发态，再由激发态的最低振动能级返回基态，同时将能量以光辐射的形式释放出来，产生化学发光。化学发光分析法是借助化学发光现象而建立起来的一种分析方法。此方法不需要复杂的仪器，不需要光源和色散装置，没有光学分析方法中常见的散射光和杂散光的干扰，大大提高了信噪比，因而具有灵敏度高、线性范围宽的优点。
5'一核苷酸酶经过生化反应后产生过氧化氢。利用化学发光技术检测过氧化氢已见诸多文献报道，但大多数是在碱性体系下测定过氧化氢的。而近中性条件多见于鲁米诺电致化学发光学，但都不大适合临床生化条件产生过氧化氢的检测.所以研究一种抗干扰能力强、测定灵敏度高、重复性好、价钱低廉 ......
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