ELISA法和胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原结果分析
【摘要】目的：分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和胶体金免疫层析(GICA)法检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)，对比结果，探讨两种方法检测乙肝表面抗原的应用价值。方法：分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和胶体金免疫层析(GICA)法检测768份18～65岁人群血清标本，对比乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)检测结果。结果：胶体金免疫层析法检测出HBsAg阳性标本42份，阳性率5.47%。ELISA法检测出HBsAg阳性标本46份，阳性率为5.98%，两种方法阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05)。两种方法检测的符合率为97.39%。胶体金免疫层析法的灵敏度为69.57%，特异度为98.61%。结论：胶体金免疫层析法操作简便、快速，检测的特异度较高，但其灵敏度有限，有待提高。
【关键词】酶联免疫吸附试验法；胶体金免疫层析法；乙肝表面抗原
【中图分类号】R722.12 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949(2015)03-0225-01
乙型病毒性肝炎，简称乙肝，是一种由乙型肝炎病毒(HBV)感染机体后所引起的疾病，是当前严重危害人类身体健康的传染病。乙型病毒肝炎表面抗原(HBsAg)阳性是感染乙肝病毒的重要指标。酶联免疫吸附试验(ELISA)法是目前我国检测乙肝HBsAg最为普及的方法，应用时间较早，而胶体金免疫层析法是近年来采用的免疫学检测方法。本组研究资料采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和胶体金免疫层析(GICA)法对768份18～65岁人群血清进行HBsAg检测，并对比检测结果。现报告如下：
1材料与方法
1.1标本来源
抽取18～65岁人群血清768份，采集无溶血、无脂浊的静脉血标本3～5ml，室温静置30min后，4000r∕min离心5min，充分分离血清待检。
1.2仪器与试剂
乙肝五项胶体金快速检测板由上海科华生物科技有限公司提供，HBsAg试纸条由蓝十字生物药业有限公司提供；ELISA检测试剂由珠海丽珠生物科技有限公司公司提供；TDL-42A低速离心机；Unto-FLiudo全自动酶标洗板机；Unto-2010酶标仪。
1.3方法
1.3.1胶体金免疫层析法 将GICA试纸条浸入待测标本，标本不可浸没标志线，浸入时间约为10分钟，根据对照线位置出现的红线条数判定结果。如对照线与检测线间位置出现1条红线为阴性，对照线与检测线间位置出现2条红线为阳性。
1.3.2酶联免疫吸附试验(ELISA)法 于相应孔中用加样器分别加入质控品、待检标本及阳性、阴性对照血清，并做好标记，然后往每个孔中加入酶标抗体，混匀，置于37°C条件下1h，严格按照说明书经洗版、添加底物，并在37°C条件下避光15min，加终止液停止反应。使用酶标仪检测OD值，并计算S∕CO值。若S∕CO≥1.0则表示实验结果为阳性，若S∕CO<1.0则表示实验结果为阴性。
1.4统计学方法
采用SPSS 17.0统计软件分析，计数资料采用百分率表示，行χ2 检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
两组方法检测HBsAg的阳性率比较：共检测768份血清标本， 两种方法检测HBsAg均阴性的712份，均阳性的32份，两种方法检测的符合率为97.39%。胶体金免疫层析法检测出HBsAg阳性标本42份，HBsAg阳性率5.47%(42∕768)。ELISA 法检测出HBsAg阳性标本46份，HBsAg阳性率为5.98%(46∕768)，两种方法阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05)。根据特异度、灵敏度计算公式，灵敏度= A / ( A + C )×100%；特异度= D/ ( B + D)×100%。A-真阳性数，B-假阳性数，C-假阴性数，D-真阴性数。得出：胶体金免疫层析法的灵敏度为69.57%，特异度为98.61%。
ELISA法和胶体金免疫层析法检测结果
胶体金免疫层析法ELISA法合计阳性+阴性﹣阳性+321042阴性﹣14712726合计467227683讨论
乙肝病毒性肝炎是严重危害人体健康的一种病毒性肝炎，由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起，血液、性接触、日常生活接触和母-婴垂直传播是HBV传播的主要方式。1965年Biumberg等首次发现乙型肝炎病毒(HBV)的表面抗原(HBsAg)，其现已成为HBV感染的重要标志，可作为乙肝病毒性肝炎的重要诊断依据。目前实验室检测乙肝HBsAg的方法有很多，如化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)、荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析(GICA)法等。酶联免疫吸附试验(ELISA)法是目前我国检测乙肝HBsAg最为普及的方法，其主要是在液相中经扩散作用，逐渐与固相表面的抗体结合，同时标记抗体也需要此过程形成抗体-抗原-标记抗体复合物，此外还需要洗涤过程和显色反应[1]。其灵敏性和特异性较高，结果可靠，但其操作程序较繁琐复杂，检测所需要的时间较长。胶体金免疫层析法是近年来出现的一种免疫学标记物检测新技术，这种检测技术不需要仪器，高浓度的抗体集中固定在纤维素的微孔中，待测抗原流经微孔与固定的抗原接触很快完成反应，检测所需要的时间较短，操作简单便捷，有较高的特异度，尤其适用于基层医疗卫生单位。但由于反应时间短，会造成弱阳性的漏检。本组研究资料分别采用酶联免疫吸附试验法和胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原，两种方法检测出的HBsAg阳性率分别为5.98%、5.47%，差异无统计学意义(P>0.05)。胶体金免疫层析法的灵敏度和特异度分别为69.57%、98.61%。综上所述，胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原操作简便快捷，检测的特异度高，但其灵敏度还有待提高。
参考文献
[1]高丽，付鸿，李慧，等.胶体金试纸法与酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原的比较[J].中国计划免疫.2007，13(1)：51-53, http://www.100md.com(李小云)
【关键词】酶联免疫吸附试验法；胶体金免疫层析法；乙肝表面抗原
【中图分类号】R722.12 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949(2015)03-0225-01
乙型病毒性肝炎，简称乙肝，是一种由乙型肝炎病毒(HBV)感染机体后所引起的疾病，是当前严重危害人类身体健康的传染病。乙型病毒肝炎表面抗原(HBsAg)阳性是感染乙肝病毒的重要指标。酶联免疫吸附试验(ELISA)法是目前我国检测乙肝HBsAg最为普及的方法，应用时间较早，而胶体金免疫层析法是近年来采用的免疫学检测方法。本组研究资料采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和胶体金免疫层析(GICA)法对768份18～65岁人群血清进行HBsAg检测，并对比检测结果。现报告如下：
1材料与方法
1.1标本来源
抽取18～65岁人群血清768份，采集无溶血、无脂浊的静脉血标本3～5ml，室温静置30min后，4000r∕min离心5min，充分分离血清待检。
1.2仪器与试剂
乙肝五项胶体金快速检测板由上海科华生物科技有限公司提供，HBsAg试纸条由蓝十字生物药业有限公司提供；ELISA检测试剂由珠海丽珠生物科技有限公司公司提供；TDL-42A低速离心机；Unto-FLiudo全自动酶标洗板机；Unto-2010酶标仪。
1.3方法
1.3.1胶体金免疫层析法 将GICA试纸条浸入待测标本，标本不可浸没标志线，浸入时间约为10分钟，根据对照线位置出现的红线条数判定结果。如对照线与检测线间位置出现1条红线为阴性，对照线与检测线间位置出现2条红线为阳性。
1.3.2酶联免疫吸附试验(ELISA)法 于相应孔中用加样器分别加入质控品、待检标本及阳性、阴性对照血清，并做好标记，然后往每个孔中加入酶标抗体，混匀，置于37°C条件下1h，严格按照说明书经洗版、添加底物，并在37°C条件下避光15min，加终止液停止反应。使用酶标仪检测OD值，并计算S∕CO值。若S∕CO≥1.0则表示实验结果为阳性，若S∕CO<1.0则表示实验结果为阴性。
1.4统计学方法
采用SPSS 17.0统计软件分析，计数资料采用百分率表示，行χ2 检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
两组方法检测HBsAg的阳性率比较：共检测768份血清标本， 两种方法检测HBsAg均阴性的712份，均阳性的32份，两种方法检测的符合率为97.39%。胶体金免疫层析法检测出HBsAg阳性标本42份，HBsAg阳性率5.47%(42∕768)。ELISA 法检测出HBsAg阳性标本46份，HBsAg阳性率为5.98%(46∕768)，两种方法阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05)。根据特异度、灵敏度计算公式，灵敏度= A / ( A + C )×100%；特异度= D/ ( B + D)×100%。A-真阳性数，B-假阳性数，C-假阴性数，D-真阴性数。得出：胶体金免疫层析法的灵敏度为69.57%，特异度为98.61%。
ELISA法和胶体金免疫层析法检测结果
胶体金免疫层析法ELISA法合计阳性+阴性﹣阳性+321042阴性﹣14712726合计467227683讨论
乙肝病毒性肝炎是严重危害人体健康的一种病毒性肝炎，由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起，血液、性接触、日常生活接触和母-婴垂直传播是HBV传播的主要方式。1965年Biumberg等首次发现乙型肝炎病毒(HBV)的表面抗原(HBsAg)，其现已成为HBV感染的重要标志，可作为乙肝病毒性肝炎的重要诊断依据。目前实验室检测乙肝HBsAg的方法有很多，如化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)、荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析(GICA)法等。酶联免疫吸附试验(ELISA)法是目前我国检测乙肝HBsAg最为普及的方法，其主要是在液相中经扩散作用，逐渐与固相表面的抗体结合，同时标记抗体也需要此过程形成抗体-抗原-标记抗体复合物，此外还需要洗涤过程和显色反应[1]。其灵敏性和特异性较高，结果可靠，但其操作程序较繁琐复杂，检测所需要的时间较长。胶体金免疫层析法是近年来出现的一种免疫学标记物检测新技术，这种检测技术不需要仪器，高浓度的抗体集中固定在纤维素的微孔中，待测抗原流经微孔与固定的抗原接触很快完成反应，检测所需要的时间较短，操作简单便捷，有较高的特异度，尤其适用于基层医疗卫生单位。但由于反应时间短，会造成弱阳性的漏检。本组研究资料分别采用酶联免疫吸附试验法和胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原，两种方法检测出的HBsAg阳性率分别为5.98%、5.47%，差异无统计学意义(P>0.05)。胶体金免疫层析法的灵敏度和特异度分别为69.57%、98.61%。综上所述，胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原操作简便快捷，检测的特异度高，但其灵敏度还有待提高。
参考文献
[1]高丽，付鸿，李慧，等.胶体金试纸法与酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原的比较[J].中国计划免疫.2007，13(1)：51-53, http://www.100md.com(李小云)