北柴胡UGT基因的克隆及其过量表达和RNAi转基因载体的构建
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[摘要]目的：克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的UGT基因，构建其过表达和抑制表达的转基因载体，为通过转基因验证其功能奠定基础。方法：在454高通量测序已获得部分cDNA序列基础上，通过RACE和LD-PCR方法扩增全长cDNA克隆。设计含有酶切位点的PCR引物，PCR扩增UGT基因的ORF和部分片段后，酶切，分别插入到pCAMBIA-SUPER 1 300和pHANNIBAL中。重组的pHANNIBAL经Not I酶切后插入到pART27中。最终以构建出过表达和抑制表达的转基因载体。结果：扩增到了北柴胡1个UGT基因全长cDNA克隆，构建了这一基因的过表达和抑制表达转基因载体。结论：通过UGT基因的全长cDNA克隆和转基因载体构建，为后续开展转基因研究，验证其生物功能奠定了基础。
[关键词]北柴胡；UGT基因；转基因载体
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