刺五加法尼基焦磷酸合酶基因的克隆、生物信息学及表达分析(3)
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2结果与分析
2.1刺五加FPS基因保守区段的获得根据已知五加科植物FPS基因的保守序列设计引物，RTPCR扩增得到950 bp的条带，见图1，将其连接PGMT载体转化大肠杆菌TOP10，测序结果经NCBI的Blast比对，确定FPSS1和FPSX1的扩增产物为刺五加FPS基因cDNA的部分片段。
1.FPS基因保守区的PCR扩增； 2.FPS基因的5′RACE； 3.FPS基因的3′RACE； 4.FPS基因cDNA全长的PCR扩增； M. DL 2 000 DNA marker。
图1刺五加FPS基因的克隆
Fig.1The clone of FPS from Eleutherococcus senticosus
2.2RACE获取刺五加FPS基因全长以刺五加cDNA的加尾产物为模板，利用引物对AP长PSSd2和AP短PSSd1进行巢式PCR和降落PCR技术相结合的5′RACE扩增，获得长450 bp的片段，见图1。以3′RACE Adaptor引物逆转录的cDNA为模板，利用引物对3′RACE outer primerFPS32和3′ RACE inner primerFPS31，应用基于巢式PCR的3′RACE扩增获得550 bp的片段(图1)。将所获得的保守区段和5′端、3′端cDNA序列进行拼接 ......
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