刺五加法尼基焦磷酸合酶基因的克隆、生物信息学及表达分析(4)
 |
| 第1页 |
参见附件。
3讨论
对于通过同源克隆法仅克隆了部分保守序列的基因而言，RACE技术是获得基因全长的有效方法，广泛应用于全长基因的克隆。在RACE技术中，获得基因3′端比较容易，而获得基因5′端则比较困难[9]。笔者在罗聪等[9]的RACE技术基础上进行了改良，首先将TdT加尾的时间缩短为2 h，但仍大于说明书中的1 h；其次将2轮PCR的退火温度降低了2 ℃，并将延伸时间延长了30 s。结果表明，2 h的加尾完全满足后期的实验要求，缩短了实验周期，而降低温度和适当延长延伸时间可有效地获得基因的5′端未知序列。
本研究克隆的刺五加FPS基因与已报道的其他植物的同一基因相比，编码区基本一致。一般认为作为异戊烯基转移酶的FPS具有2个富含天冬氨酸(DDXXD)的氨基酸序列保守域[LIVM] [LIVM] XDDXXDXXXXRRG和[LIVMFY] GXXFQ [LIVM] XDD [LIVMFY] X [DN] [6，1011]，刺五加FPS蛋白90～104 [LVLDDIMDSSHTRRG]和224～236 [MGTYFQVQDDYLD]位的氨基酸残基与此完全相符。刺五加FPS的跨膜分析和亚细胞定位的结果显示其无跨膜结构，定位于细胞质中，这与其他植物FPS在细胞质中合成前体蛋白后不进入其他亚细胞器，而是留在细胞质中经过翻译后蛋白质的加工成为成熟蛋白质发挥催化作用 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。