不同光质对丹参生长及有效成分积累和相关酶活性的影响(2)
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参见附件。
C4H 酶活性的测定：取新鲜材料0.5 g，迅速用蒸馏水洗净表面杂质，吸水纸吸干水分。加入5 mL 4 ℃下预冷的提取介质(0.1 mol·L-1磷酸缓冲液、0.25 mol·L-1蔗糖、0.5 mmol·L-1 EDTA，2 mmol·L-1巯基乙醇，pH 7.6)，冰浴下迅速研磨匀浆后，过滤，滤液在4 ℃下7 200×g离心30 min，上清液用于酶活性的检测。测定系统含有酶液0.2 mL，50 mmol·L-1肉桂酸0.2 mL，0.4 g·L-1 NAPDH 0.2 mL，0.1 mol L-1磷酸缓冲液(pH 7.6)3 mL，对照不加肉桂酸。反应液于30 ℃保温30 min，加入浓盐酸调pH 2.0终止反应，取上清液用NaOH调pH 11，在310 nm 下测定吸光度，以每分钟A变化0.01为1个酶活单位U。
TAT酶活性的测定方法：取新鲜材料，迅速用蒸馏水洗净表面杂质，吸水纸吸干水分。加入5 mL 4 ℃下预冷的提取介质(0.1 mol·L-1磷酸甲缓冲液、0.1 mmol·L-1 EDTA，80 mol·L-1α酮戊二酸，0.2 mmol·L-1 Vit B6，1 mmol·L-1 DTT，pH 7.3)，冰浴下迅速研磨匀浆后，过滤，滤液在4 ℃下7 200×g离心30 min，上清液用于酶活性的检测。测定系统含有酶液0.2 mL，0.2 mol·L-1磷酸钾缓冲液(pH 7.5)3 mL，10 mmol·L-1 α酮戊二酸0.2 mL，88 mmol·L-1酪氨酸0.2 mL，0.2 mmol·L-1 VB6 0 ......
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