缺氧诱导因子—1抑制剂细胞筛选模型的建立及抑制剂研究(2)
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2.4MTT法测定化合物对肿瘤细胞增殖的影响将对数生长期的细胞，用0.25%胰酶EDTA 消化后，配制成一定浓度的单细胞悬液，根据细胞生长速度的差异，按 800～1 500个/孔接种于 96 孔板，每孔加入细胞悬液 100 μL。24 h后，加入含不同浓度化合物及相应溶剂对照的新鲜培养基，每孔加100 μL(DMSO终浓度<0.1%)，每种受试化合物设5～7个剂量组，每组至少设3个平行孔，于37 ℃继续培养96 h后，弃上清，每孔加入200 μL新鲜配制的含0.5 g·L-1 MTT的无血清培养基，继续培养4 h，弃上清后，每孔加入200 μL DMSO溶解MTT甲臜沉淀，微型振荡器振荡混匀后，应用酶标仪在参考波长450 nm、检测波长570 nm条件下测定吸光度A，抑制率=(A对照-A受试药)/A对照×100%。
2.5统计学分析数据以±s表示， 数据分析采用Student′s ttest检验，P<0.05 为差异有统计学意义。
3结果
3.1U251HRE细胞筛选模型与雷公藤甲素活性检测人神经胶质瘤U251HRE与U251pGL3细胞系分别为已稳定转染pGL2TKHRE，pGL3 control 萤火虫荧光素酶质粒的细胞系。缺氧(1%O2 20 h)使U251HRE细胞在萤火虫荧光素酶的表达升高10倍左右，而对U251pGL3细胞荧光素酶的表达不产生明显影响(图1)。雷公藤甲素对U251HRE细胞的因缺氧诱导的荧光素酶表达具有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性关系，而对非缺氧依赖的荧光素酶表达影响小(U251pGL3) ......
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