一个新的丹参3羟基3甲基戊二酰辅酶A还原酶3基因的克隆及其表达分析(2)
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2.5 丹参HMGR3基因的表达谱分析 盛花期丹参根、茎和叶的总RNA用Trizol法(Invitrogen)提取；继代培养3周的丹参毛状根，加入诱导子Ag+至终浓度30 mmol·L-1进行诱导处理，分别于诱导子处理后0，6，12，24，36，48，72 h 后收获毛状根，每个处理3次重复，用滤纸吸干，各样品称取约0.1 g 液氮速冻后用Trizol法提取总RNA。
经Ag+诱导处理后，丹参毛状根中SmHMGR3基因表达水平于24 h时达到峰值，之后迅速降低，其最高值达到同基因对照组的7.716倍；SmHMGR1基因在银离子诱导下mRNA水平变化不大，而SmHMGR2基因随着银离子诱导时间的延长，表达水平逐渐提高，也在24 h达到最高点，是同基因对照组的5.448倍，见图5。Ag+是非生物诱导子的一种，经前期实验证明Ag+对于丹参二萜类化合物积累有着显著的促进作用，因此该实验中使用Ag+处理材料进行分析，以期发现基因表达与次生代谢物积累之间的联系。从上述结果可知，丹参3条HMGR基因中，SmHMGR2和SmHMGR3基因对Ag+诱导子有着较强的响应，推断其在丹参二萜类成分积累过程中有着较为重要的作用，有利于代谢流向目的产物丹参酮类成分流动。
4 讨论
本文利用丹参转录组数据首次从丹参中克隆得到了一条新的3羟基3甲基戊二酰辅酶A还原酶3基因，并对其进行了系统进化树分析和氨基酸序列比对分析，发现HMGR3基因与家族中另外2条基因有着相同的催化功能域，推测其具有相同的催化HMGCoA生成MVA的功能。SmHMGR3基因在叶片中mRNA表达水平最高，在根中表达水平较低，这可能由于HMGR基因位于萜类次生代谢的上游途径，为各种萜类终产物提供共同的前体物质IPP和DMAPP ......
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