金丝桃苷的大鼠胚胎胎仔发育毒性研究
[摘要] 目的：观察金丝桃苷对Wistar大鼠的胚胎胎仔发育毒性，为妊娠期安全用药提供参考。方法：取健康受孕大鼠，随机分为金丝桃苷低、中、高(30，175，1 000 mg·kg-1)剂量组、阳性对照组(环磷酰胺，7 mg·kg-1)和溶媒对照组(等体积1%羧甲基纤维素钠水溶液)。分别于母鼠受孕后第6～15天灌胃给予1%羧甲基纤维素钠水溶液和金丝桃苷，环磷酰胺组于母鼠受孕后第11～13天皮下注射给药。给药后观察孕鼠饮水、摄食、生长等一般状况，妊娠第20天处死孕鼠。观察母体动物的临床症状、体重变化、黄体数、着床数、胚胎生存死亡情况、生存胎仔的体重、性别、外观、内脏及骨骼检查等指标。结果：金丝桃苷对各给药组的母鼠和胎鼠的外观、内脏及骨骼发育均未见明显异常。但是金丝桃苷高剂量组可致胎鼠体重增长减缓，身长和尾长缩短(P<0.05)。结论：在本实验条件下，金丝桃苷对胎鼠生长发育有一定影响，建议临床用药时怀孕妇女应慎用。
[关键词] 金丝桃苷；大鼠；胚胎胎仔发育毒性
, 百拇医药 1 材料
1.1 药物 金丝桃苷(相对分子质量464.3)，系从锦葵科秋葵属植物黄蜀葵Abelmoschus manihot L. medic的花中提取分离而得，纯度93.11%，批号070525，由解放军302医院药学部提供。注射用环磷酰胺由山西普德药业有限公司生产(批号20070105)。
1.2 动物 Wistar大鼠，SPF级，雌鼠体重200.3～229.4 g，雄鼠体重260.0～279.1 g，山东大学实验动物中心提供(NO0004091)。试验期间动物饲养于山东大学新药评价中心屏障系统412室(环境设施合格证号：鲁动环字D20060722号)，温度保持在21.6～23.3 ℃，湿度保持在52.7%～70.3%，人工光照， 12 h明暗交替，换气次数为10～20次/ h，自由饮食饮水。
1.3 仪器 JY10001电子天平(山东良平仪器仪表有限公司)；电子卡尺(青海量具刃具有限公司)；GRg2T1连续变倍双目体视显微镜(上海锦之堂进出口贸易有限公司)。
, 百拇医药
2 方法
2.1 交配方法 Wistar大鼠按雄与雌1∶2合笼，次日晨对雌鼠进行阴栓与阴道涂片显微镜检查，查见精子与阴栓同时存在者判为交配成功，定为妊娠0 d。
2.2 分组与给药 将孕鼠按照体重和交配成功时间随机分为5组，每组20只，分别为金丝桃苷低、中、高剂量组(30，175，1 000 mg·kg-1)，环磷酰胺组(7 mg·kg-1)和溶媒对照组(1%羧甲基纤维素钠水溶液)。除环磷酰胺组外，4组孕鼠均于妊娠后第6天开始给药，连续10 d(第6～15天)，给药期间每天上午口服灌胃给药1次，给药体积为15 mL·kg-1，对照组给予等体积1%羧甲基纤维素钠水溶液。环磷酰胺组孕鼠在妊娠第11～13天皮下注射给药，连续给药3 d。
2.3 孕期观察和胎仔检察 孕期内定期观察孕鼠的摄食、饮水、生长等一般状况，定期称量孕鼠体重和摄食量。妊娠20 d时处死孕鼠，记录黄体数、死胎数、着床数、吸收胎数、活胎数以及活胎体重、性别，测量其身长、尾长。观察并记录有无外观畸形及畸形类型、部位和程度。将1/2活胎鼠用Bouins液浸泡固定2周，徒手切片，进行内脏畸形检查。剩余胎鼠放入95%乙醇固定2周，l%氢氧化钾溶液透明、茜素红染色、透明液透明、甘油保存。解剖镜下观察有无骨骼畸形、变异。
, http://www.100md.com
2.4 统计方法 各项数据用的Excel，DAS软件和SPSS软件进行统计分析，定性资料用χ2检验，定量资料用t检验，畸变率用秩和检验。
3 结果
3.1 金丝桃苷对孕鼠的影响 与对照组相比，环磷酰胺组给药后可见孕鼠自主活动明显降低、精神萎靡、摄食量减少、体重增长缓慢(P<0.0l或P<0.05)，而金丝桃苷各组孕鼠自主活动、精神状态、摄食量和体重等均未发现明显异常。金丝桃苷对孕鼠体重和摄食量的影响分别见表1，2。
3.2 金丝桃苷对胚胎形成的影响 母体检查结果见表3。环磷酰胺组的胎仔数、活胎数、死胎数、吸收胎数都与对照组有显著性差异(P<0.0l或P<0.05)，而金丝桃苷高、中、低剂量组与对照组相比，均无显著性差异。此外，胎儿性别比亦无明显差异。
3.3 金丝桃苷对胎鼠生长发育的影响 由表4可见金丝桃苷高剂量组胎鼠身长、尾长和体重明显低于对照组(P<0.05)；环磷酰胺组胎鼠的身长、尾长、体重显著低于对照组(P<0.0l)。金丝桃苷中、低剂量组胎鼠的体重、身长、尾长与对照组比较无显著差异。在胎鼠外观畸形检查中，除环磷酰胺组胎鼠发现有外观畸形外，其余各组均未发现外观畸形。
, 百拇医药
3.4 金丝桃苷对胎鼠内脏和骨骼畸形的影响 金丝桃苷各剂量组与对照组胎鼠比较内脏和骨骼未见明显变化，没有发生畸形和变异，而环磷酰胺组内脏畸变率为85.7%，主要表现为脑膨出，骨骼畸变率为100%，主要表现为颅骨畸形、骨化不全等。见表5。
4 讨论
本研究设定低、中、高3个剂量组(30，175，1 000 mg·kg-1)，分别为临床拟用剂量大鼠等效剂量的4，23.3，133倍。阳性对照药环磷酰胺的剂量应使胎鼠产生明显的畸形而又不会使胎鼠大量死亡变成吸收胎和死胎，以便于进行骨骼检查和内脏检查。根据课题组以往的研究经验，孕鼠在妊娠11～13 d皮下给予环磷酰胺7 mg·kg-1，效果很好，因此本试验阳性对照药剂量亦采用7 mg·kg-1。
实验结果显示，各组孕鼠自主活动、精神状态、摄食量和体重等均未发现明显异常，活胎率、死胎率、吸收胎率和胎鼠性别比未见明显差异，胎鼠骨骼、内脏检查也未发现明显异常。但是，金丝桃苷1 000 mg·kg-1·d-1给药可致胎鼠体重增长减缓，身长和尾长缩短，即对胎鼠生长发育有一定的影响，建议临床用药时怀孕妇女应慎用。
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[参考文献]
[1] 王燕， 王先荣， 马凤余， 等. 金丝桃苷在植物中的分布及其含量测定[J]. 安徽医药， 2009， 13(11)： 1312.
[2] 黄凯， 杨新波， 黄正明. 金丝桃苷药理作用研究进展[J]. 医药导报， 2009， 28(8)： 1046.
[3] Wu L L， Yang X B， Huang Z M， et al. In vivo and in vitro antiviral activity of hyperoside extracted from Abelmoschus manihot (L) medic [J]. Acta Pharmacol Sin， 2007， 28 (3)： 404.
[4] 鲁小杰， 黄正明， 杨新波， 等. 金丝桃苷对鸭乙肝病毒感染的保肝作用[J]. 中药药理与临床， 2007， 23(2)： 10.
[5] 鲁小杰， 杨新波， 耿淼， 等. 鸭乙肝模型氧化应激反应及金丝桃苷的干预[J].中国组织工程研究与临床康复， 2007，11(43)： 8729.
[6] 耿淼， 王建华， 陈红艳， 等. 金丝桃苷对鸭乙肝病毒 cccDNA 清除及免疫调节作用探讨[J]. 药学学报， 2009， 44 (12)： 1440.
[7] 曾克武，王学美，富宏，等. 金丝桃苷对氯化钴所致的PC12细胞损伤模型的保护作用和机制研究[J].中国中药杂志，2011，36(17)：2409., http://www.100md.com(艾国 黄正明 王德文 刘兆平)
[关键词] 金丝桃苷；大鼠；胚胎胎仔发育毒性
, 百拇医药 1 材料
1.1 药物 金丝桃苷(相对分子质量464.3)，系从锦葵科秋葵属植物黄蜀葵Abelmoschus manihot L. medic的花中提取分离而得，纯度93.11%，批号070525，由解放军302医院药学部提供。注射用环磷酰胺由山西普德药业有限公司生产(批号20070105)。
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2 方法
2.1 交配方法 Wistar大鼠按雄与雌1∶2合笼，次日晨对雌鼠进行阴栓与阴道涂片显微镜检查，查见精子与阴栓同时存在者判为交配成功，定为妊娠0 d。
2.2 分组与给药 将孕鼠按照体重和交配成功时间随机分为5组，每组20只，分别为金丝桃苷低、中、高剂量组(30，175，1 000 mg·kg-1)，环磷酰胺组(7 mg·kg-1)和溶媒对照组(1%羧甲基纤维素钠水溶液)。除环磷酰胺组外，4组孕鼠均于妊娠后第6天开始给药，连续10 d(第6～15天)，给药期间每天上午口服灌胃给药1次，给药体积为15 mL·kg-1，对照组给予等体积1%羧甲基纤维素钠水溶液。环磷酰胺组孕鼠在妊娠第11～13天皮下注射给药，连续给药3 d。
2.3 孕期观察和胎仔检察 孕期内定期观察孕鼠的摄食、饮水、生长等一般状况，定期称量孕鼠体重和摄食量。妊娠20 d时处死孕鼠，记录黄体数、死胎数、着床数、吸收胎数、活胎数以及活胎体重、性别，测量其身长、尾长。观察并记录有无外观畸形及畸形类型、部位和程度。将1/2活胎鼠用Bouins液浸泡固定2周，徒手切片，进行内脏畸形检查。剩余胎鼠放入95%乙醇固定2周，l%氢氧化钾溶液透明、茜素红染色、透明液透明、甘油保存。解剖镜下观察有无骨骼畸形、变异。
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3 结果
3.1 金丝桃苷对孕鼠的影响 与对照组相比，环磷酰胺组给药后可见孕鼠自主活动明显降低、精神萎靡、摄食量减少、体重增长缓慢(P<0.0l或P<0.05)，而金丝桃苷各组孕鼠自主活动、精神状态、摄食量和体重等均未发现明显异常。金丝桃苷对孕鼠体重和摄食量的影响分别见表1，2。
3.2 金丝桃苷对胚胎形成的影响 母体检查结果见表3。环磷酰胺组的胎仔数、活胎数、死胎数、吸收胎数都与对照组有显著性差异(P<0.0l或P<0.05)，而金丝桃苷高、中、低剂量组与对照组相比，均无显著性差异。此外，胎儿性别比亦无明显差异。
3.3 金丝桃苷对胎鼠生长发育的影响 由表4可见金丝桃苷高剂量组胎鼠身长、尾长和体重明显低于对照组(P<0.05)；环磷酰胺组胎鼠的身长、尾长、体重显著低于对照组(P<0.0l)。金丝桃苷中、低剂量组胎鼠的体重、身长、尾长与对照组比较无显著差异。在胎鼠外观畸形检查中，除环磷酰胺组胎鼠发现有外观畸形外，其余各组均未发现外观畸形。
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3.4 金丝桃苷对胎鼠内脏和骨骼畸形的影响 金丝桃苷各剂量组与对照组胎鼠比较内脏和骨骼未见明显变化，没有发生畸形和变异，而环磷酰胺组内脏畸变率为85.7%，主要表现为脑膨出，骨骼畸变率为100%，主要表现为颅骨畸形、骨化不全等。见表5。
4 讨论
本研究设定低、中、高3个剂量组(30，175，1 000 mg·kg-1)，分别为临床拟用剂量大鼠等效剂量的4，23.3，133倍。阳性对照药环磷酰胺的剂量应使胎鼠产生明显的畸形而又不会使胎鼠大量死亡变成吸收胎和死胎，以便于进行骨骼检查和内脏检查。根据课题组以往的研究经验，孕鼠在妊娠11～13 d皮下给予环磷酰胺7 mg·kg-1，效果很好，因此本试验阳性对照药剂量亦采用7 mg·kg-1。
实验结果显示，各组孕鼠自主活动、精神状态、摄食量和体重等均未发现明显异常，活胎率、死胎率、吸收胎率和胎鼠性别比未见明显差异，胎鼠骨骼、内脏检查也未发现明显异常。但是，金丝桃苷1 000 mg·kg-1·d-1给药可致胎鼠体重增长减缓，身长和尾长缩短，即对胎鼠生长发育有一定的影响，建议临床用药时怀孕妇女应慎用。
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