3结果与分析

    3.1总RNA质量检测

    分别提取6个不同时期正茬和重茬地黄根、茎、叶3个不同部位的RNA，共18个样，琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量。结果发现，RNA中28S，18S，5S这3条带清晰可见，且28S带亮度约是18S的2倍，表明提取RNA有较好的完整性，符合实验要求。

    3.2连作响应候选基因功能注释分析

    经数据库功能注释分析，筛选出10个响应地黄连作的候选基因，通过对这些基因在地黄中可能作用的相关功能预测分析得出以下结果：正库中基因(重茬地黄中特异基因)编码的蛋白钙依赖性蛋白激酶、钙蛋白酶主要参与钙信号传递和蛋白质分解，SAM合成酶和ACC氧化酶主要参与乙烯的合成，甲基转移酶主要参与生理调控和染色质修。而反库中基因(正茬地黄中特异基因)RNA复制酶、RNA聚合酶、依赖于DNA的RNA聚合酶IIa这3种酶主要参与转录调控和植物抗病毒作用，细胞周期蛋白D为细胞分裂的“执照因子”，主要与细胞生长与分裂，而RNA结合蛋白主要参与基因的表达调控和抗逆反应(表2)。

    3.3目的基因在正茬和重茬地黄中的时空表达

    3.3.1正库中筛选的5个基因在地黄中的时空表达1U96(钙依赖性蛋白激酶)、1Z71(SAM合成酶)、1V38(ACC氧化酶)、1V26(甲基转移酶)和1H1(钙蛋白酶)5个基因，在重茬地黄的根、茎、叶中均有较高的表达量 ......