1.4Western blot检测 TLR4蛋白表达RAW264.7巨噬细胞1×106个/mL，接种3 mL于培养瓶内，待细胞生长至单层时按照上述分组处理，收集细胞，PBS冲洗2次，蛋白裂解液震荡 40 min(4 ℃)，取上清液，BCA法测蛋白浓度，10% SDS-PAGE 凝胶电泳，4 ℃ 300 mA 恒流电转膜70 min，5%脱脂奶粉室温封闭1 h，一抗孵育液 (TLR4 l∶100； β-actin 1∶500)4 ℃过夜，PBS-T漂洗；山羊抗兔IgG-HRP二抗反应液(1∶1万)，室温2 h，PBS-T漂洗。化学发光，显影，定影后进行图像半定量分析。

    1.5免疫细胞化学检测NF-κB核转移将专用无菌盖玻片放入24孔培养板中，接种RAW264.7巨噬细胞3×105个/mL，每孔1 mL，待细胞85%汇合后按照上述分组处理，收集细胞爬片，多聚甲醛固定、TritonX-100破膜后，3%过氧化氢室温10 min消除过氧化物酶活性，PBS漂洗，5%山羊血清室温封闭15 min；一抗(NF-κB p65 1∶200)4 ℃冰箱过夜 ......