槐定碱与TLR4/MD—2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4—NF—κB—TNF—α通路的影响(1)
槐定碱与TLR4,MD—2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4—NF—κB—TNF—α通路的影响,TLR4,MD-2阻断剂
[摘要]目的:研究槐定碱及TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响,探讨其抗内毒素的药理机制。方法:培养RAW264.7巨噬细胞,分为5组:空白对照组,LPS模型组,槐定碱+LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+ LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组,各组分别于处理完毕后120 min时收集细胞及细胞培养液。Western blot检测TLR4蛋白表达,免疫细胞化学检测NF-κB 蛋白的分布与表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB,TNF-α mRNA 表达,放射免疫分析法检测细胞培养液中TNF-α含量。结果:与LPS模型组比较,槐定碱+LPS组TLR4蛋白,NF-κB mRNA与 NF-κB入核率,TNF-α mRNA 及培养液中TNF-α含量均显著降低(P<0.01);TLR4/MD-2阻断剂+ LPS组与TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组NF-κB mRNA及NF-κB入核率 ......
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