葛根素预处理对LPS诱导RAW264.7细胞活化的影响(2)
2.5细胞形态学检测调整 RAW264.7细胞悬液密度为2×105个/mL，加入24孔培养板中，每孔1 mL，置 37 ℃，5%CO2孵箱培养24 h。吸除旧培养液，根据细胞分组处理后，取培养上清，离心去除细胞沉淀，-20 ℃保存，贴壁细胞用预冷的PBS液洗3遍，4%多聚甲醛固定10 min后，按照Giemsa试剂盒说明常规细胞染色，预冷的PBS液洗3遍后，倒置显微镜下观察细胞形态变化。2.6TNF-α及MIP- 2的检测取-20 ℃保存的细胞上清液，采用酶联免疫试剂盒检测TNF-α及MIP- 2含量。
2.7测定NF-κB p65 的表达RAW264.7细胞2×106个/mL加入6孔板中，每孔2 mL，根据细胞分组处理后，吸除培养液，TRIzol法提取总RNA后，按照RT 逆转录试剂盒操作说明将总RNA逆转录成cDNA，置-80 ℃冰箱保存。按照SYBR Green PCR试剂盒说明扩增NF-κB p65 (引物序列见表1)。
2.8统计学处理实验数据用x±s表示，采用 SPSS 13.0软件进行统计学分析 ......
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