25—35所致PC12细胞损伤的保护作用> 清心开窍方含药脑脊液对Aβ25—35所致PC12(2)
RNA纯度鉴定:取5 μL RNA溶液,加DEPC水稀释至60 μL,以DEPC水作为空白对照,读取紫外分光光度计260,280 nm波长的吸光度,计算其A260/A280。RNA浓度测定:取5 μL RNA溶液,加DEPC水稀释至60 μL,枪头混匀,以DEPC水作为空白对照,读取紫外分光光度计260 nm波长下的吸光度。按公式计算RNA浓度(g·L-1)=A260 ×40×60/5/1 000。
RNA完整性鉴定:应用1%甲醛变性的琼脂糖电泳鉴定RNA完整性。
一步法RT-PCR扩增:参照一步法RT-PCR试剂盒说明进行操作。Bax(扩增片段376 bp):上游5′-TGGTTGCCCTTTTCTACTTTG -3′,下游5′-GAAGTAGGAAAGGAGGCCATC -3′;Bcl-2(扩增片段236 bp):上游5′-GCATCTTCTCCTTCCAG-3′,下游5′-ATCCCAGCCTCCGTTAT-3′;Caspase-3(扩增片段420 bp):上游5′-GGTATTGAGACAGACAGTGG -3′ ......
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