无患子皂苷对自发性高血压大鼠主动脉血管内皮功能调节作用的实验研究(1)
[摘要] 目的：通过研究无患子皂苷对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats， SHR)离体主动脉血管对于不同血管收缩剂和舒张剂反应性以及对血管内皮活性物质血清含量的影响，考察无患子皂苷对SHR内皮功能的调节作用，为进一步研究其作用及机制提供实验依据。方法：取16周龄SHR 40只，随机均分为5组，即SHR模型组、阳性对照组(卡托普利，27 mg·kg-1)、无患子皂苷低、中、高(27，54，108 mg·kg-1)剂量组，另取8只健康WKY大鼠作为正常对照组，按剂量连续给药8周，检测指标如下：① 对胸主动脉血管对于不同血管收缩剂KCl(20～120 mmol·L-1)，PE(1×10-8～1×10-4mol·L-1)，AngⅡ(1×10-9～10-5mol·L-1)反应性的影响；②对Ach(1×10-10～1×10-5 mol·L-1)血管内皮依赖性及SNP(1×10-8～1×10-3mol·L-1)非内皮依赖性血管舒张反应的影响；③ ELISA法检测对血管活性物质NO，6-KPG1α，ET-1，TXB2血清含量的影响。结果：SHR模型组内皮损伤、功能失衡，表现为主动脉环对KCl，PE，AngⅡ诱发的血管收缩反应性增强，对Ach诱发的内皮依赖性舒张反应减弱，而对SNP诱发的非内皮依赖性舒张反应未见明显变化；其血清TXB2，ET-1含量增加，而NO，6-KPG1α含量减少；无患子皂苷各剂量组可抑制主动脉对KCl，PE，AngⅡ的收缩反应，增强对Ach的内皮依赖性舒张效应，降低血清TXB2，ET-1含量，增加NO，6-KPG1α含量，上述指标与SHR对照组有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论：无患子皂苷对SHR内皮功能具有一定的保护作用，其机制与恢复血管内皮活性物质TXB2，ET-1/NO，6-KPG1α平衡状态有关。
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[关键词] 无患子皂苷；自发性高血压；内皮功能
在2005 年美国高血压学会(ASH)的会议上，ASH Writing Group提出了高血压的新定义，认为高血压是一种由多种病因引起的处于不断进展状态的心血管综合征，可导致心脏以及血管功能与结构的改变。新定义改变了以往对于高血压仅从单纯的数值判断的标准，而是将概念扩展到了总的心血管危险因素，并建议将全身的血管床作为整体进行研究，包括各种危险因素、动脉血管的粥样硬化、内皮细胞功能的损害、高脂血症、亚临床疾病和心血管事件等[1]。血管内皮功能障碍在原发性高血压(essential hypertension，EH)患者中普遍存在、密切相关，一方面它是高血压病的诱导因素之一，参与了高血压的发生、发展和转归及靶器官的损害，并且具有一定的遗传倾向[2]；另一方面高血压时血管切应力增加，进一步加重血管内皮在结构和功能上发生改变[3]。因此，有观点认为血管内皮损伤及功能障碍是高血压发生、发展过程中“内皮-高血压-心血管事件链”的始动因子和载体[4]。本课题组前期研究表明无患子皂苷可降低肾性高血压模型大鼠的血压，改善其左心室做功，并对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats， SHR)也有显著的降压作用[5]。本实验拟通过研究无患子皂苷对SHR离体主动脉血管对于不同血管收缩剂和舒张剂反应性以及对血管内皮活性物质血清含量的影响，考察无患子皂苷对SHR内皮功能的调节作用。
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1 材料
1.1 药物与试剂 无患子皂苷(sapindus saponin)为淡棕色粉末，是无患子科植物无患子树的种子无患子假种皮中提取的有效部位。以常春藤皂苷元为对照品，经紫外分光光度法测定，含总皂苷量95.6%。乙酰胆碱(acetylcholine chloride，Ach，批号201004256)，氯化钾(potassium chloride，KCl，批号200905362)，血管紧张素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ，AngⅡ，批号201001382)，苯肾上腺素(phenylephrine，PE，批号200912054)，硝普钠(sodium nitroprusside dihydrate，SNP，批号20100251)均购于Sigma公司；一氧化氮(nitric oxide，NO)酶联免疫检测试剂盒(批号R20165)，血栓素B2(thromboxane-B2 ，TXB2) 酶联免疫检测试剂盒(批号R30152)，内皮素-1(endothelin-1，ET-1)酶联免疫检测试剂盒(批号G30112)，6-酮-前列腺素1α(6-keto-prostaglandin 1α，6-KPG1α)酶联免疫检测试剂盒(批号H03252)，均购于上海源叶生物科技有限公司。
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1.2 仪器 MK3全自动酶标分析仪(上海弘联公司)；HV-4离体组织器官恒温灌流系统(成都泰盟科技有限公司)；-80 ℃超低温冰箱(美国Advantage)；LDZ4型微量离心机(北京医用离心机厂)；电子天平(美国Mettler Toledo)；微量移液器(德国Eppendorf)。
1.3 动物 16周龄SHR 40只，雌雄各半(雌性未孕)，体重200～250 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号SCXK(京)2007-001；相同周龄健康Wistar-Kyoto strain(WKY)大鼠16只，雌雄各半，体重200～250 g，由南京医科大学动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK(苏)2008-0004。鼠料由安徽长临河医药科技有限公司提供，合格证号 SCXK(皖) 2007-001。饲养于安徽医科大学实验动物中心，SPF级，实验动物使用许可证号SYXK(皖)2011-007。, http://www.100md.com(陈明 陈志武 龙子江 高华武 卞海 王雅娟 王靓)
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[关键词] 无患子皂苷；自发性高血压；内皮功能
在2005 年美国高血压学会(ASH)的会议上，ASH Writing Group提出了高血压的新定义，认为高血压是一种由多种病因引起的处于不断进展状态的心血管综合征，可导致心脏以及血管功能与结构的改变。新定义改变了以往对于高血压仅从单纯的数值判断的标准，而是将概念扩展到了总的心血管危险因素，并建议将全身的血管床作为整体进行研究，包括各种危险因素、动脉血管的粥样硬化、内皮细胞功能的损害、高脂血症、亚临床疾病和心血管事件等[1]。血管内皮功能障碍在原发性高血压(essential hypertension，EH)患者中普遍存在、密切相关，一方面它是高血压病的诱导因素之一，参与了高血压的发生、发展和转归及靶器官的损害，并且具有一定的遗传倾向[2]；另一方面高血压时血管切应力增加，进一步加重血管内皮在结构和功能上发生改变[3]。因此，有观点认为血管内皮损伤及功能障碍是高血压发生、发展过程中“内皮-高血压-心血管事件链”的始动因子和载体[4]。本课题组前期研究表明无患子皂苷可降低肾性高血压模型大鼠的血压，改善其左心室做功，并对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats， SHR)也有显著的降压作用[5]。本实验拟通过研究无患子皂苷对SHR离体主动脉血管对于不同血管收缩剂和舒张剂反应性以及对血管内皮活性物质血清含量的影响，考察无患子皂苷对SHR内皮功能的调节作用。
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1 材料
1.1 药物与试剂 无患子皂苷(sapindus saponin)为淡棕色粉末，是无患子科植物无患子树的种子无患子假种皮中提取的有效部位。以常春藤皂苷元为对照品，经紫外分光光度法测定，含总皂苷量95.6%。乙酰胆碱(acetylcholine chloride，Ach，批号201004256)，氯化钾(potassium chloride，KCl，批号200905362)，血管紧张素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ，AngⅡ，批号201001382)，苯肾上腺素(phenylephrine，PE，批号200912054)，硝普钠(sodium nitroprusside dihydrate，SNP，批号20100251)均购于Sigma公司；一氧化氮(nitric oxide，NO)酶联免疫检测试剂盒(批号R20165)，血栓素B2(thromboxane-B2 ，TXB2) 酶联免疫检测试剂盒(批号R30152)，内皮素-1(endothelin-1，ET-1)酶联免疫检测试剂盒(批号G30112)，6-酮-前列腺素1α(6-keto-prostaglandin 1α，6-KPG1α)酶联免疫检测试剂盒(批号H03252)，均购于上海源叶生物科技有限公司。
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1.2 仪器 MK3全自动酶标分析仪(上海弘联公司)；HV-4离体组织器官恒温灌流系统(成都泰盟科技有限公司)；-80 ℃超低温冰箱(美国Advantage)；LDZ4型微量离心机(北京医用离心机厂)；电子天平(美国Mettler Toledo)；微量移液器(德国Eppendorf)。
1.3 动物 16周龄SHR 40只，雌雄各半(雌性未孕)，体重200～250 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号SCXK(京)2007-001；相同周龄健康Wistar-Kyoto strain(WKY)大鼠16只，雌雄各半，体重200～250 g，由南京医科大学动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK(苏)2008-0004。鼠料由安徽长临河医药科技有限公司提供，合格证号 SCXK(皖) 2007-001。饲养于安徽医科大学实验动物中心，SPF级，实验动物使用许可证号SYXK(皖)2011-007。, http://www.100md.com(陈明 陈志武 龙子江 高华武 卞海 王雅娟 王靓)