丹参2—C—甲基—D—赤藓糖醇 2，4—环焦磷酸合成酶(SmMCS)基因全长克隆及其生物信息学分析(2)
2.4 SmMCS基因的表达分析 取0.1 g毛状根样本采用Trizol试剂盒提取总RNA，用Takara反转录试剂盒反转录成cDNA。其过程为：总RNA模板1 μL(约200 ng)，dNTP 1 μL，Radom 6 mers 2 μL，不含RNase的去离子水至10 μL，离心，置于PCR仪上，65 ℃ 5 min，之后冰上急冷。然后在离心管中加入如下反应液，5×PrimerScript Buffer 4 μL，RNase Inhibitor 0.5 μL，PrimeScript Rtase 1 μL，RNase free H2O 4.5 μL。PCR条件为30 ℃ 10 min，42 ℃ 60 min，70 ℃ 15 min，所得cDNA用于Real-time PCR。根据丹参内参β-actin和所克隆的丹参SmMCS的核苷酸序列设计引物(表1) ......
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