化痰散结中药治疗甲状腺肿的作用机制(2)
2.3 尿碘测定 砷铈催化分光光度法(中华人民共和国卫生行业标准)测定。2.4 甲状腺功能测定及相对质量测定 RIA法测定血清中的TT3,TT4,美国D.P.C公司试剂盒。IRMA法测定血清TSH,美国Amersham公司试剂盒。甲状腺指数以甲状腺湿重除以体重来计算。
2.5 Western Blot法测VEGF和TGF-β1 表达 取出标本100 mg ,加入冰预冷的细胞裂解液500 μL , 将组织块剪碎,冰水浴中超声粉碎。4 ℃,12 000 r·min-1离心1 h,取上清。采用酚试剂法测定蛋白浓度,取标本蛋白100 μL,加入100 μL样品缓冲液,煮沸5 min。各标本蛋白上样50 μL。电泳,转印,洗膜,用含5%去脂奶粉TTBS封闭4 ℃过夜,一抗、二抗孵育,TTBS洗脱,酶显法显色剂显色。采用FlourChem V2.0凝胶成像分析软件分析,记录每条蛋白电泳带的灰度值,进行定量分析。
2.6 免疫组织化学法测试Fas, FasL,PCNA 蛋白的表达 将组织脱水、透明,浸蜡,包埋,切片,展片;石蜡切片常规二甲苯脱蜡和乙醇脱水;蒸馏水冲洗3次 ......
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