2.3 荧光素酶响应试验 用含3%血清的DMEM分别收集融合度达到70%～90%的NMU2R细胞、转染24 h后的阴性细胞和siRNA干扰24 h后的NMU2R细胞，接种于96孔板中，细胞数约为每孔2×10⁴～5×10⁴个，孵育过夜；然后，分别向每个孔中加入待测样品组、待测样品+Forskolin组、Forskolin对照组、NMU对照组、空白对照组，每组3个复孔，培养6～8 h后，向每孔中加入与培养液同体积的 0.5×Bright-Glo^TM底物试剂，并用荧光检测仪测定荧光素酶响应信号值。

    2.4 Western blot试验 将提取的蛋白用SDS-PAGE分离后，转印到PVDF膜上，随后用5%脱脂奶粉的TBST室温封闭1 h，然后直接用山羊抗NMU2R一抗4 ℃孵育12 h，抗体用封闭液稀释约5 000倍，TBST漂洗3次，每次15 min；再用HRP标记的二抗继续孵育1 h，抗体用封闭液稀释约8 000倍。在显影之前用TBST漂洗3次，每次15 min；再用HRP底物(Millpore)室温孵育5 min后 ......