2.6 Western blot法检测cyclin B1，CDK1和cyclin D1蛋白表达 5 μmol·L^-1 PLAB作用细胞12，24 h后，收集细胞，预冷PBS溶液洗细胞2次，每孔加入100 μL细胞裂解液[含50 mmol·L^-1 Tris-HCl(pH 8.3)，150 mmol·L^-1 NaCl，0.02%十二烷基硫酸钠，1%NP-40，0.5%脱氧胆酸钠，0.1%原矾酸钠，100 μmol·L^-1苯甲基磺酰氟溶液]，用细胞刮将细胞刮下，冰上裂解30 min，4 ℃低温12 000 r·min^-1离心15 min，吸取上清。样品采用BCA法蛋白定量，上样60 μg蛋白，进行SDS-PAGE，转移至聚氟乙烯(PVDF)膜上。5%脱脂奶粉封闭2 h后，加入1∶1 000稀释的兔抗人cyclin B1，CDK1和cyclin D1多克隆抗体，4 ℃孵育过夜，TBST洗膜后，加入1∶3 000稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗室温孵育2 h，TBST洗涤，经ECL液化学发光，暗室X光片曝光，显影定影，重复实验3次，用Bandscan 5.0软件进行A分析 ......