山菠菜三萜组分在体外及体内对II相解毒酶的调控作用机制(2)
2.4 GSH水平与GST活力的检测 取各组细胞和组织裂解液,采用南京建成生物工程研究所研制的试剂盒测定,按照说明书进行操作。在酶标仪下测定各组吸光度,计算得出细胞内GSH水平与GST活力。2.5 NQO1活力的检测 NQO1的活性采用DCIP的第二电子受体进行测定[16]。取定好量的蛋白5 μL加入0.9 mL反应缓冲液(含50 mmol·L-1Tris-HCI,pH 7.5,0.25 mmol·L-1NADPH,80 μmol·L-1DCIP),在600 nm处测定3 min,以每毫克样品蛋白每分钟吸光度的下降值表示NQO1的活力。
NQO1活力=(A开始-A结束)/反应时间(3 min)/蛋白浓度
2.6 Western blot检测NQO1,Nrf2蛋白表达 细胞裂解液煮沸变性后进行SDS-PAGE凝胶电泳 ......
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