3 结果与分析

    3.1 Total RNA提取和反转录 以十五年生针叶为材料，对获取的Total RNA采用Oligotex mRNA Midi Kits纯化mRNA，在操作中对实验流程作了适当的修改，重复用Buffer OBB洗1次，大大提高了mRNA纯化效率，分离纯化后的mRNA经核酸定量仪测定A，所得的mRNA纯度较高，质量和数量为构建高质量cDNA文库提供了保证。为了得到全长cDNA，本实验采用了Clontech SMART PCR cDNA合成试剂盒。在cDNA合成引物3′SMART CDS PrimerⅡA和SMART ⅡA 寡核苷酸引物存在下，以0.8～1.0 μg mRNA为模板合成cDNA 1st链。接着采用Clontech Advantage 2 PCR Kits进行长链PCR扩增，合成cDNA 2nd链。为了获得二链合成最佳反应循环数，各取4 μL二链合成反应液电泳检测，最后确定最佳二链循环数为13 次循环(图1)。

    M.Marker；9～15.循环数 ......