3.5 微卫星标记的验证 采用PRIMER3软件，依据SSRs模体邻近序列设计PCR引物，总共有519条EST-SSRs获得了正向和反向引物，包括257条singletons和262条contigs，扩增产物平均长度为204 bp (Supp.1)。为了验证SSRs的准确性，本实验构建了种内小样本群体，随机挑选了10个SSRs模体，采用克隆测序的方法来验证SSRs模体序列的正确性。在随机挑选的SSRs模体中，有8个获得了Sanger测序的结果(Supp.2)。分布在FXAT9O003C3EB0上的SSR序列，在Sanger测序中重复序列为GGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGA，在454测序中重复序列为GGAGGGAGGGAG，两种测序方法得到的结果并不一致。其余7个SSRs模体通过2种方法得到的序列是一致的，占全部EST-SSRs的87.5%。

    4 讨论

    药用植物多态性分子标记的研究目前相对较少，在红豆杉属中还未有报道。这显然与裸子植物的基因组序列较为庞大，伴有大量的高度重复序列 ......