1.4 双向位点特异性PCR鉴别 取不同样品DNA进行双向等位基因特异性PCR， PCR反应体系为2.5 μL 10× Ex Taq buffer，2 μL 10 mmol·L^-1 dNTPs，引物Lj-1F，lj-2R各0.08 pmol，引物Lj-1R，lj-2F各0.2 pmol，0.5 U Ex Taq酶，约10 ng DNA 模板。反应在Eppendorf公司的Mastercycler型PCR扩增仪上进行。反应程序见表2。反应结束后在PCR反应体系内加入5 μL 6× loading buffer，混匀后于EB染色的1%浓度琼脂糖凝胶电泳检测，SYNGENE凝胶成像系统观察、成像。

    在忍冬DNA提取液内加入混淆品的DNA，充分混合使得混淆品DNA依次占总DNA含量的1%，5%，10%，20%，50%，90%，100%。PCR反应体系及反应程序同上。

    2 结果及讨论

    2.1 双向位点特异性PCR引物设计 在Genbank数据库中共获得忍冬属植物叶绿体和ITS序列1 002条 ......