3 结果

    3.1 pET-HMGR表达载体的构建与鉴定

    对构建的重组表达载体pET-HMGR进行PCR和酶切验证，结果表明目的片段大小正确。上海生工测序结果进一步证明，ORF框完整，说明构建表达载体成功。

    3.2 蛋白诱导表达及纯化

    SDS-PAGE电泳检测结果见图2，其中1和3为未诱导组，2和4为诱导组。30 ℃诱导4 h后可以表达出大量的融合蛋白，相对分子质量约为80 kDa，与预测的融合蛋白相对分子质量一致。Ni-NTA柱纯化后可获得比较干净的目的蛋白。

    3.3 不同HMGR基因型表达蛋白催化产物测定

    3.3.1 Bradford法定量蛋白浓度以及蛋白加入量的确定 分别测定0，0.025，0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 g·L^-1不同质量浓度的蛋白的吸光度A595，得标准曲线Y=0.731 7X+0.360 2(n=3)，其Y表示A595 ......