不同发育阶段对黄芩生长及活性成分积累的影响(2)
2.3 总RNA提取与cDNA合成 用Invitrogen公司的Trizol reagent提取山东产地黄芩根组织总RNA，利用紫外分光光度仪测定总RNA的A 260nm，A280nm。选择A 260nm / 280nm为1.8～2.0的总RNA进行反转录，反转录反应按cDNA合成试剂盒(TaKaRa公司)说明书进行。2.4 半定量RT-PCR 取上述反转录产物1 μL，分别加入表1中各基因正向引物0.5 μL (10 pmol·μL-1)，反向引物0.5 uL (10 pmol·μL-1)，dNTP 1 μL，10×Buffer 2.5 μL，Ex Taq酶0.5 μL，灭菌H2O 19 μL。反应条件为：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，30个循环；72 ℃充分延伸10 min。采用上述体系扩增相关基因的表达情况，以18S rRNA基因片段为内标，在目标PCR产物长度位置出现条带为相关酶基因有表达。以凝胶成像仪上扫描的各目标基因与18S rRNA的光吸收比值差异来表示目标基因在样本中的表达量 ......
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