中药材DNA条形码分子鉴定指导原则(4)
基于大量前期研究结果[12,33-50],中药材DNA条形码分子鉴定法选用ITS2和psbA-trnH作为植物类药材的核心条形码,COI和ITS2作为动物类中药材的核心条形码。2.2 中药材DNA 提取方法的确定
2.2.1 植物基因组DNA提取方法的确定依据 植物基因组DNA提取方法较多,常用基于CTAB原理的试剂盒法和改良的CTAB法[51]。应用不同公司植物基因组DNA提取试剂盒等提取中药材基因组DNA,结果表明试剂盒法适用于中药材基因组DNA的提取。由于中药材所含成分复杂,可针对不同入药部位改进DNA提取试剂盒方法[52]。
常用液氮研磨和球磨仪(钢珠法)法来粉碎样品,液氮研磨的优点是保持低温状态,防止DNA降解,缺点是耗时且在样品种类较多时,容易产生交叉污染。球磨仪的优点是可以同时粉碎多份样品,有效避免样品间的污染。
针对根及根茎、花、果实、种子和皮类等药材质地,确定各自合适的样品量。通过对2 373份药材样品的DNA提取实验,叶类、花类药材取样量约10~20 Mg2+ ......
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