2.6 实时定量PCR(Q-PCR)检测下丘脑CRF mRNA表达 分离大鼠下丘脑组织，Trizol法提取总RNA并进行逆转录，Q-PCR采用SYBR Green染料法，反应条件： 50 ℃ 2 min； 95 ℃ 10 min； 40个循环(95 ℃ 15 s； 64 ℃ 60 s)。引物序列：CRF sense 5′-CAGAACAACAGTGCGGGCTCA-3′， antisense 5′-AAGGCAGACAGGGCGACAGAG-3′； β-actin sense 5′-TTGCTGACAGGATGCAGAA-3′， antisense 5′-ACCAATCCACACAGAGTACTT-3′。目的基因mRNA的相对表达量根据2^-ΔΔCt的公式及方法进行换算。

    2.7 免疫组化法检测下丘脑室旁核GR的表达 按免疫组化试剂盒说明书进行，用PBS代替一抗作为阴性对照。具体如下：下丘脑组织石蜡切片常规脱蜡至水，高压抗原修复，3% H₂O₂灭活内源性酶 ......