以羟基磷灰石为载体的穿心莲内酯固体分散体研究(1)
[摘要] 目的：以羟基磷灰石为载体制备穿心莲内酯固体分散体，提高药物溶出度。方法：将穿心莲内酯和羟基磷灰石分散于95%乙醇中，采用溶剂蒸发法制备穿心莲内酯固体分散体，对其溶出行为、稳定性、物相特征进行研究。结果：穿心莲内酯和羟基磷灰石按1∶8制备的固体分散体，经差示扫描量热、X衍射、电镜分析，固体分散体中药物以非晶形式存在于载体中，45 min时药物的体外累积溶出度达到93%；经过3个月稳定性加速试验后，固体分散体中药物溶出度和含量均未发生明显变化。结论：以羟基磷灰石为载体制备的固体分散体能有效提高难溶性药物穿心莲内酯的溶出度和稳定性。
[关键词] 穿心莲内酯；羟基磷灰石；固体分散体；溶出度；稳定性
穿心莲内酯(andrographolide)是从爵床科植物穿心莲中提取得到的二萜内酯类化合物，是中药穿心莲的主要成分之一，具有解热、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等作用[1-3]。穿心莲内酯不溶于水，微溶于乙醇等有机溶剂，且脂溶性较差，体内吸收缓慢，生物利用度低，限制了其药效的发挥及临床应用。
, 百拇医药
应用固体分散体技术可以改善难溶性药物的溶解性能，提高溶出速率及溶出度，从而提高药物口服生物利用度[4-5]。但药物在固体分散体中以微粒、微晶、分子状态等形式分散，处于热力学不稳定状态，经一段时间放置后，经常会出现老化现象[6]。羟基磷灰石是人体和动物骨骼的主要无机成分，组织相容性好、无毒、无免疫原性，作为药物载体十分安全[7]。同时羟基磷灰石比表面积大，易于吸附药物，有可能抑制固体分散体老化现象[8]。本研究尝试制备了穿心莲内酯羟基磷灰石固体分散体，对其制备工艺、体外释放速度、稳定性、物相特征进行了研究。
1 材料
DZF-6051型真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；ZRS-8G型智能释放试验仪(天津大学无线电厂)；DSC204差示扫描量热仪(德国Netzsch公司)；6390LV扫描电镜(日本电子公司)；D8型X-射线衍射仪(德国Bruke公司)；NEXU670傅立叶变换红外/拉曼光谱仪(美国 Thermo Nicole公司)；Agilent 1200高效液相色谱仪(包括四元泵，自动进样器，DAD二极管阵列检测器)；数显气浴恒温振荡器(金坛市双捷实验仪器厂)；METTLERAL204 1/10万天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。穿心莲内酯对照品(纯度>98%，中国食品药品检定研究院，批号110715-201016)；穿心莲内酯(纯度>98%，南京泽郎医药科技有限公司，批号ZL20120205CXL)；羟基磷灰石(MH-HAP04-20，MH-HAP05，MH-HAP06-12，南京埃普瑞纳米材料有限公司，批号EM110917314)；十二烷基硫酸钠(SDS，成都市科隆化工试剂厂，批号20110516)；甲醇为色谱纯，水为高纯水，其余试剂均为分析纯。
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2 方法
2.1 固体分散体的制备
称取适量穿心莲内酯原料药，加适量95%乙醇，水浴加热，使药物完全溶解。再分别按物与载体质量比例(1∶4，1∶6，1∶8，1∶10)，精密称取羟基磷灰石加适量95%乙醇分散。药物与载体的乙醇溶液充分混匀，40 ℃减压旋转蒸发除去溶剂。真空干燥，研细过80目筛，得到固体分散体，置干燥器内保存备用。
2.2 物理混合物的制备
称取适量穿心莲内酯原料药，按1∶8质量比例准确称取羟基磷灰石置于乳钵中研细，混匀，过80目筛，置干燥器内保存备用。
2.3 色谱条件
Hanbon C18色谱柱(5 mm×250 mm，4.6 μm )；流动相甲醇-水(32∶68)，流速1.0 mL·min-1；检测波长220 nm；柱温25 ℃；进样量10 μL。
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2.4 标准曲线、精密度、重复性
取穿心莲内酯对照品9.58 mg，精密称定，置于10 mL量瓶中，加沸乙醇适量溶解，冷却至室温，定容配制成母液；精密移取母液1.0 mL，以乙醇稀释定容至10 mL，得95.8 mg·L-1的储备液。分别精密移取储备液0.40，0.80，1.2，1.6，2.0，2.4 mL置于10 mL量瓶中，用乙醇稀释定容，得不同浓度的对照品溶液。摇匀，滤过，分别精密量取10 μL注入HPLC仪，测定峰面积(A)，将质量浓度(C)与A进行线性回归，得标准曲线方程A = 20.615C + 0.746 3，r=0.999 3；线性范围4.0～24 mg·L-1。
精密吸取上述对照品溶液10 μL，1 d内连续进样6次，测定其峰面积，并计算相对标准偏差(RSD)；精密吸取上述对照品溶液10 μL，连续进样6 d，每天进样2次，测定含量并计算RSD。结果显示，日内、日间所测含量RSD<1.9%，表明日内、日间精密度良好。
, 百拇医药
精密称取同1次制备的穿心莲内酯固体分散体适量，平行配制6份供试品溶液，分别进样，计算含量，RSD为1.6%(n=6)，表明方法重复性好。
2.5 阴性空白试验
按照2.1项下方法制备不含穿心莲内酯的样品，于同样的色谱条件下测定。结果表明，羟基磷灰石在220 nm检测波长下无吸收，对穿心莲内酯测定无干扰。
2.6 药物体外溶出度测定
精密称取穿心莲内酯原料药、物理混合物(1∶8)、不同载体比例的固体分散体样品，每个样品中穿心莲内酯质量约为20 mg。按2010年版《中国药典》二部附录XC桨法溶出度测定方法，以0.2%SDS的人工胃液900 mL为溶出介质，转速50 r·min-1，(37±0.5) ℃，分别于15，30，45，60，90 min取样5 mL(同时补加同温度等量释放介质)，0.8 μm微孔滤膜过滤，取续滤液10 μL进行HPLC测定，测定结果代入标准曲线计算浓度，并换算成溶出率。, http://www.100md.com(胡绍英，张振海，贾晓斌)
[关键词] 穿心莲内酯；羟基磷灰石；固体分散体；溶出度；稳定性
穿心莲内酯(andrographolide)是从爵床科植物穿心莲中提取得到的二萜内酯类化合物，是中药穿心莲的主要成分之一，具有解热、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等作用[1-3]。穿心莲内酯不溶于水，微溶于乙醇等有机溶剂，且脂溶性较差，体内吸收缓慢，生物利用度低，限制了其药效的发挥及临床应用。
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应用固体分散体技术可以改善难溶性药物的溶解性能，提高溶出速率及溶出度，从而提高药物口服生物利用度[4-5]。但药物在固体分散体中以微粒、微晶、分子状态等形式分散，处于热力学不稳定状态，经一段时间放置后，经常会出现老化现象[6]。羟基磷灰石是人体和动物骨骼的主要无机成分，组织相容性好、无毒、无免疫原性，作为药物载体十分安全[7]。同时羟基磷灰石比表面积大，易于吸附药物，有可能抑制固体分散体老化现象[8]。本研究尝试制备了穿心莲内酯羟基磷灰石固体分散体，对其制备工艺、体外释放速度、稳定性、物相特征进行了研究。
1 材料
DZF-6051型真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；ZRS-8G型智能释放试验仪(天津大学无线电厂)；DSC204差示扫描量热仪(德国Netzsch公司)；6390LV扫描电镜(日本电子公司)；D8型X-射线衍射仪(德国Bruke公司)；NEXU670傅立叶变换红外/拉曼光谱仪(美国 Thermo Nicole公司)；Agilent 1200高效液相色谱仪(包括四元泵，自动进样器，DAD二极管阵列检测器)；数显气浴恒温振荡器(金坛市双捷实验仪器厂)；METTLERAL204 1/10万天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。穿心莲内酯对照品(纯度>98%，中国食品药品检定研究院，批号110715-201016)；穿心莲内酯(纯度>98%，南京泽郎医药科技有限公司，批号ZL20120205CXL)；羟基磷灰石(MH-HAP04-20，MH-HAP05，MH-HAP06-12，南京埃普瑞纳米材料有限公司，批号EM110917314)；十二烷基硫酸钠(SDS，成都市科隆化工试剂厂，批号20110516)；甲醇为色谱纯，水为高纯水，其余试剂均为分析纯。
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2 方法
2.1 固体分散体的制备
称取适量穿心莲内酯原料药，加适量95%乙醇，水浴加热，使药物完全溶解。再分别按物与载体质量比例(1∶4，1∶6，1∶8，1∶10)，精密称取羟基磷灰石加适量95%乙醇分散。药物与载体的乙醇溶液充分混匀，40 ℃减压旋转蒸发除去溶剂。真空干燥，研细过80目筛，得到固体分散体，置干燥器内保存备用。
2.2 物理混合物的制备
称取适量穿心莲内酯原料药，按1∶8质量比例准确称取羟基磷灰石置于乳钵中研细，混匀，过80目筛，置干燥器内保存备用。
2.3 色谱条件
Hanbon C18色谱柱(5 mm×250 mm，4.6 μm )；流动相甲醇-水(32∶68)，流速1.0 mL·min-1；检测波长220 nm；柱温25 ℃；进样量10 μL。
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2.4 标准曲线、精密度、重复性
取穿心莲内酯对照品9.58 mg，精密称定，置于10 mL量瓶中，加沸乙醇适量溶解，冷却至室温，定容配制成母液；精密移取母液1.0 mL，以乙醇稀释定容至10 mL，得95.8 mg·L-1的储备液。分别精密移取储备液0.40，0.80，1.2，1.6，2.0，2.4 mL置于10 mL量瓶中，用乙醇稀释定容，得不同浓度的对照品溶液。摇匀，滤过，分别精密量取10 μL注入HPLC仪，测定峰面积(A)，将质量浓度(C)与A进行线性回归，得标准曲线方程A = 20.615C + 0.746 3，r=0.999 3；线性范围4.0～24 mg·L-1。
精密吸取上述对照品溶液10 μL，1 d内连续进样6次，测定其峰面积，并计算相对标准偏差(RSD)；精密吸取上述对照品溶液10 μL，连续进样6 d，每天进样2次，测定含量并计算RSD。结果显示，日内、日间所测含量RSD<1.9%，表明日内、日间精密度良好。
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精密称取同1次制备的穿心莲内酯固体分散体适量，平行配制6份供试品溶液，分别进样，计算含量，RSD为1.6%(n=6)，表明方法重复性好。
2.5 阴性空白试验
按照2.1项下方法制备不含穿心莲内酯的样品，于同样的色谱条件下测定。结果表明，羟基磷灰石在220 nm检测波长下无吸收，对穿心莲内酯测定无干扰。
2.6 药物体外溶出度测定
精密称取穿心莲内酯原料药、物理混合物(1∶8)、不同载体比例的固体分散体样品，每个样品中穿心莲内酯质量约为20 mg。按2010年版《中国药典》二部附录XC桨法溶出度测定方法，以0.2%SDS的人工胃液900 mL为溶出介质，转速50 r·min-1，(37±0.5) ℃，分别于15，30，45，60，90 min取样5 mL(同时补加同温度等量释放介质)，0.8 μm微孔滤膜过滤，取续滤液10 μL进行HPLC测定，测定结果代入标准曲线计算浓度，并换算成溶出率。, http://www.100md.com(胡绍英，张振海，贾晓斌)