2.2 半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析缺血肾与非缺血肾中Apelin与APJ mRNA的表达 用TRNzol-A+从肾脏组织中提取总RNA(100 g·L^-1)，提取方法严格按照说明书操作。随后，在逆转录反应体系中加入RNA 2 μg，10×RT Mix 2 μL，dNTP混合液2 μL，Oligo-dT15 2 μL，Quant Reverse Transcriptase 1 μL，最后加入RNase-free水，使反应总体积达到20 μL。逆转录反应体系在37 ℃下反应60 min，在70 ℃下15 min使产物变性。合成的cDNA于-20 ℃下保存。PCR模板(南京金斯瑞生物科技有限公司)如下：Apelin上游引物5′-CAAGGATCCCTTTGGCCC-3′，下游引物5′-AGGAGAAGCTGGGTCTCCAAG-3′，产物长度66 bp；APJ上游引物5′-CTGCTGAGCATCATCGTGGT-3′，下游引物5′-AGGGCCAGTGCAGCAAATT-3′ ......