芦丁完全抗原的合成鉴定及免疫原性分析(2)
2.2.2 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定 用超纯水将玻璃板洗净,喷上75%乙醇,烘干后安装好。先制备分离胶,用无水乙醇封满,垂直静置60 min,完全聚合后倾去乙醇,用超纯水洗净。再配制成层胶,并加在分离胶表面,然后用力均匀地插入梳子,聚合50 min后小心的拔去梳子。把凝胶板与电泳槽安装好,加入电极缓冲液并没过加样孔。分别取1 g·L-1牛血清蛋白、卵清蛋白和芦丁-牛血清蛋白偶合物、芦丁-卵清蛋白偶联物按4∶1比例加上样缓冲液并在沸水中煮5 min,每孔点样量均为10 μL。实验采用Tris-甘氨酸体系(pH 8.3)作为电泳缓冲液,稳压电泳。首先100 V电压预电泳,指示带跑至分离胶时,再调节电压150 V,电泳60 min。电泳结束后取出凝胶板,切去成层胶,分离胶放入平皿内,在摇床上用改良银染法成像。首先用超纯水漂洗2次。固定液固定10 min,再用超纯水漂洗5 min。25%戊二醛增敏7 min,再用超纯水漂洗3次,每次3 min。染色液染色10 min,再用20%乙醇漂洗2次,每次3 min ......
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